[发明专利]一种基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法

权利要求书

1.一种基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法，其特征在于，包括：

a.检测肺炎链球菌抗体效价的具体操作为：通过以BLP为载体，对原核表达的重组抗原PspA-PA进行结合，形成BLP/PspA-PA抗原复合体，以此抗原复合体去结合待测血清中的抗PspA的IgG，再利用酶标记的二抗对其进行定量检测；

b.检测肺炎链球菌抗原的具体操作为：通过以BLP为载体，对原核表达的重组单链抗体scFV-PspA-PA进行结合，形成BLP/scFV-PspA-PA单链抗体复合体，以此单链抗体复合体去结合待测样品中的抗原PspA或肺炎链球菌细胞，再利用抗PspA的IgG和酶标记的二抗对抗原PspA或肺炎链球菌细胞进行定量检测；

c.检测新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体效价的具体操作为：通过以BLP为载体，对原核表达的重组抗原S-PA进行结合，形成BLP/S-PA抗原复合体，以此抗原复合体去结合待测血清中的抗S蛋白的IgG，再利用酶标记的二抗对其进行定量检测；

d.检测新型冠状病毒SARS-CoV-2抗原的具体操作为：通过以BLP为载体，对原核表达的重组单链抗体scFV-S-PA进行结合，形成BLP/scFV-S-PA单链抗体复合体，以此单链抗体颗粒去结合待测样品中的抗原S蛋白或病毒颗粒，再利用抗S蛋白的IgG和酶标记的二抗对抗原S蛋白或病毒颗粒进行定量检测。

2.根据权利要求1所述的基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法，其特征在于，所述BLP的制备方法为：将培养的乳酸乳球菌与三氯乙酸进行加热处理，通过洗涤纯化去除杂质，留下无生命力的肽聚糖壳，即为BLP。

3.根据权利要求1所述的基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法，其特征在于，所述PspA-PA重组抗原的制备方法为：选择PspA家族2亚类4的α螺旋区和脯氨酸富集区序列，并在其脯氨酸富集区的C端融合表达锚定蛋白PA，通过化学合成基因序列，在合成前对序列进行优化，选择大肠杆菌偏爱的密码子，使其在大肠杆菌中高表达，然后将其克隆构建于pET20b原核表达载体上，转化入大肠杆菌BL21中进行表达，优化蛋白的表达条件，并进行诱导表达候选蛋白，通过His Trap亲和纯化柱获得目的蛋白PspA-PA。

4.根据权利要求1所述的基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法，其特征在于，所述S-PA重组抗原的制备方法为：SARS-CoV-2的S蛋白抗原为S蛋白的部分序列，通过基因工程技术在原核系统中进行表达和制备，作为含量测定的目标抗原。

5.根据权利要求1所述的基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法，其特征在于，所述scFV-S-PA单链抗体的制备方法为：选择一种抗S蛋白的单克隆抗体为母体，以其重链可变区为N端，轻链可变区为C端，或者以其轻链可变区为N端，重链可变区为C端，通过连接肽相连，在单链抗体的C端融合表达锚定蛋白PA，通过化学合成基因序列，在合成前对序列进行优化，选择大肠杆菌偏爱的密码子，使其在大肠杆菌中高表达，然后将其克隆构建于pET20b原核表达载体上，转化入大肠杆菌BL21中进行表达，优化蛋白的表达条件，并进行诱导表达候选蛋白，通过His Trap亲和纯化柱获得目的蛋白scFV-S-PA。