[发明专利]一种基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法

说明书

本发明适用于免疫学技术领域，提供了一种基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法，本发明以细菌蛋白(BP)或病毒蛋白(VP)为检测目标，利用细菌样颗粒(BLP)为固相载体，检测内容包括：通过BLP与锚定蛋白(PA)间的非共价结合作用固定重组表达的抗原BP(VP)‑PA，产生BLP/BP(VP)‑PA抗原复合体，检测血清中抗BP(VP)的IgG效价；通过BLP与锚定蛋白(PA)间的非共价结合作用固定重组表达的单链抗体scFV‑BP(VP)‑PA，产生BLP/scFV‑BP(VP)‑PA复合体，检测BP(VP)蛋白抗原的含量。本发明实现了快速检测，降低检测费用的效果，并且能够提高检测灵敏度。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及一种基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法。

背景技术

细菌和病毒是人类和动物各类传染病的主要病源体，其引起的传染病给人类的健康带来了严重威胁，因此，对这些传染病的快速诊断和识别，对阻止其传播和防治尤为重要。对这些病源体的诊断主要包括抗原诊断和抗体诊断，从原理上，这些检测方法主要是PCR法检测其核酸、ELISA法检测其抗原和抗体等。这些检测方法往往有其各自的缺点，如：ELISA法需要进行封闭、多次洗涤，费时费力，步骤比较繁琐，还需要96孔板，费用较高，这些缺点都需要加以改进。为此我们提出一种基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法，旨在解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种基于细菌样颗粒检测细菌和病毒抗原、抗体的方法，包括：

a.检测肺炎链球菌抗体效价的具体操作为：通过以BLP为载体，对原核表达的重组抗原PspA-PA进行结合，形成BLP/PspA-PA抗原复合体，以此抗原复合体去结合待测血清中的抗PspA的IgG，再利用酶标记的二抗对其进行定量检测；

b.检测肺炎链球菌抗原的具体操作为：通过以BLP为载体，对原核表达的重组单链抗体scFV-PspA-PA进行结合，形成BLP/scFV-PspA-PA单链抗体复合体，以此单链抗体复合体去结合待测样品中的抗原PspA或肺炎链球菌细胞，再利用抗PspA的IgG和酶标记的二抗对抗原PspA或肺炎链球菌细胞进行定量检测；

c.检测新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体效价的具体操作为：通过以BLP为载体，对原核表达的重组抗原S-PA进行结合，形成BLP/S-PA抗原复合体，以此抗原复合体去结合待测血清中的抗S蛋白的IgG，再利用酶标记的二抗对其进行定量检测；

d.检测新型冠状病毒SARS-CoV-2抗原的具体操作为：通过以BLP为载体，对原核表达的重组单链抗体scFV-S-PA进行结合，形成BLP/scFV-S-PA单链抗体复合体，以此单链抗体颗粒去结合待测样品中的抗原S蛋白或病毒颗粒，再利用抗S蛋白的IgG和酶标记的二抗对抗原S蛋白或病毒颗粒进行定量检测。

进一步的，所述BLP的制备方法为：将培养的乳酸乳球菌与三氯乙酸进行加热处理，通过洗涤纯化去除杂质，留下无生命力的肽聚糖壳，即为BLP。

进一步的，所述PspA-PA重组抗原的制备方法为：选择PspA家族2亚类4的部分序列(α螺旋区和脯氨酸富集区)，并在其脯氨酸富集区的C端融合表达锚定蛋白PA，通过化学合成基因序列，在合成前对序列进行优化，选择大肠杆菌偏爱的密码子，使其在大肠杆菌中高表达，然后将其克隆构建于pET20b原核表达载体上，转化入大肠杆菌BL21中进行表达，优化蛋白的表达条件，并进行诱导表达候选蛋白，通过His Trap亲和纯化柱获得目的蛋白PspA-PA。