[发明专利]NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体、编码序列、基因工程菌及应用有效
| 申请号： | 202211546169.8 | 申请日： | 2022-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN115806951B | 公开（公告）日： | 2023-06-30 |
| 发明（设计）人： | 曾伟民;黄斌;邱冠周;杨凯;刘学端;周洪波;刘阿娟 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P33/00;C12P33/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 长沙市融智专利事务所(普通合伙) 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410083 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | nadh 依赖 羟基 类固醇 脱氢酶 突变体 编码 序列 基因工程 应用 | ||
1.一种NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于， 所述突变体为以下任一种：
(a)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第94 位的异亮氨酸突变成缬氨酸，该突变体命名为
(b)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第95位的丙氨酸均突变成缬氨酸，该突变体命名为
(c)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第191位的丙氨酸突变成苏氨酸，该突变体命名为
(d)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第94位的异亮氨酸和第95位的丙氨酸均突变成缬氨酸，该突变体命名为
(e)将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第94位的异亮氨酸突变成缬氨酸和第191位的丙氨酸突变成苏氨酸，该突变体命名为
（f）将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第95位的丙氨酸突变成缬氨酸和第191位的丙氨酸突变成苏氨酸，该突变体命名为
（g）将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第94位的异亮氨酸和第95位的丙氨酸均突变成缬氨酸，第191位的丙氨酸突变成苏氨酸，该突变体命名为
2.一种编码NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的基因，其特征在于，为编码权利要求1所述的NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体中的任一种的基因序列。
3.含有权利要求2所述编码基因的重组表达载体。
4.含有权利要求3所述重组表达载体的基因工程菌。
5.NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的应用，其特征在于，使用权利要求1所述的7β-羟基类固醇脱氢酶突变体催化7-酮石胆酸制备熊去氧胆酸。
6.NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的应用，其特征在于，使用权利要求1所述的7β-羟基类固醇脱氢酶突变体催化牛磺-7-酮石胆酸制备牛磺熊去氧胆酸。
7.NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的应用，其特征在于，使用权利要求1所述的7β-羟基类固醇脱氢酶突变体催化7-酮胆酸制备熊胆酸。
8.NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的应用，其特征在于，使用权利要求1所述的7β-羟基类固醇脱氢酶突变体催化7，12-二酮胆酸制备12-酮-熊去氧胆酸。
9.根据权利要求5～8任一项所述NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的应用，其特征在于，催化反应中用到的辅酶NADH是由甲酸脱氢酶催化甲酸合成得到的，甲酸在甲酸脱氢酶催化下转变成CO2，同时反应中的NAD+还原成NADH，从而实现辅酶NADH的循环再生。
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