[发明专利]一种物料保湿功效的体外评价方法

权利要求书

1.一种物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，以人永生表皮细胞构建细胞模型，将参试物料作用于所述细胞模型，通过表征所述参试物料作用于所述细胞模型所引起所述细胞模型中保湿因子的含量变化量，以评价所述参试物料的保湿功效；其中所述保湿因子包括吡咯烷酮羧酸、尿刊酸中的至少一种。

2.如权利要求1所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，包括如下步骤：

细胞裂解步骤，使所述人永生表皮细胞裂解以获得细胞裂解液；

样品液制作步骤，对所述细胞裂解液进行总蛋白含量定量校正，以制得待测样品液；

样品液检测步骤，检测所述待测样品液中的所述保湿因子的含量。

3.如权利要求2所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，在所述细胞裂解步骤中，裂解温度不高于0℃。

4.如权利要求2所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，在所述细胞裂解步骤中，裂解液为添加有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液，按照质量百分比计算，在所述RIPA裂解液中含有1％聚乙二醇辛基苯基醚、1％脱氧胆酸钠以及0.1％十二烷基硫酸钠。

5.如权利要求2所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，所述样品液制作步骤包括以下操作：

S1.对所述细胞裂解液进行总蛋白含量测定；

S2.将所述细胞裂解液的总蛋白含量调节至预设值，得到总蛋白定量裂解液；

S3.使所述总蛋白定量裂解液中的蛋白发生酶解，得到酶解混合物；

S4.对所述酶解混合物进行分离纯化，并收集经过分离纯化后得到的上清液，以该上清液制备所述待测样品液。

6.如权利要求5所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，在所述样品液制作步骤的S3中，酶解温度为50℃±3℃。

7.如权利要求5所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，在所述样品液制作步骤的S4中包括如下操作：

先向所述酶解混合物中加入甲醇并充分混合，对由此得到的混合物进行离心操作，收集上清液作为第一上清液，使所述第一上清液的溶剂挥干，然后向剩余物料中加入去离子水，对由此得到的混合物进行离心操作，收集上清液作为第二上清液，以所述第二上清液作为所述待测样品液；

在上述过程中，在不高于0℃的温度范围内以及惰性氛围条件下，使所述第一上清液的溶剂挥干。

8.如权利要求2所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，在所述样品液检测步骤中，所述保湿因子在待测样品液中的含量通过液相色谱法检测，所采用的流动相由甲酸铵溶液和乙腈复配而成。

9.如权利要求8所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，

当所述保湿因子包括吡咯烷酮羧酸，在所述样品液检测步骤中，在210nm的检测波长下，测定吡咯烷酮羧酸在所述待测样品液中的含量；

当所述保湿因子包括尿刊酸，在所述样品液检测步骤中，在270nm的检测波长下，测定尿刊酸在所述待测样品液中的含量。

10.如权利要求8所述物料保湿功效的体外评价方法，其特征在于，在所述样品液检测步骤中，所采用的色谱柱为C18液相色谱柱，柱温为30℃±2℃。