[发明专利]一种物料保湿功效的体外评价方法

说明书

本发明提供一种物料保湿功效的体外评价方法，以人永生表皮细胞(HaCaT细胞)构建细胞模型，将参试物料作用于细胞模型，通过表征参试物料作用于细胞模型所引起细胞模型中保湿因子的含量变化量，以评价参试物料的保湿功效；其中保湿因子包括吡咯烷酮羧酸(PCA)、尿刊酸(UCA)中的至少一种。HaCaT细胞中的PCA含量和UCA含量的变化能够准确地反应物料的保湿作用情况，由此，本发明提供的物料保湿功效的体外评价方法能够对参试物料作用于人体皮肤的保湿效果作出准确、可靠的评价。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体地，涉及一种物料保湿功效的评价方法。

背景技术

皮肤分为表皮、真皮、皮下组织及皮肤附属。表皮位于皮肤的最外层，由里到外分为基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。最外面的角质层能有效阻止外界有害因素入侵人体和防止体内水分、营养物质流失。

保湿是皮肤护理的基础，研究者们也在不断的推出新的保湿功效验证方法。2020年发布的《化妆品保湿功效评价体外重组3D表皮模型测试方法》作为化妆品功效评价的团体标准，但此方法需要购买3D表皮模型，导致保湿功效检测的成本较高。专利CN108982716A和CN111289655A均公开了一种使用皮肤角质贴片测定保湿因子PCA、UCA的方法，但仅限于人体实验，对筛选物料具有一定的局限性。基于此，如何以简便、可靠、无损人体的方式了解物料的保湿功效，是本领域技术人员在研究中急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种物料保湿功效的体外评价方法，以在无损人体组织的前提下，对物料的保湿功效进行可靠、准确的评估。

根据本发明的一个方面，提供一种物料保湿功效的体外评价方法，以人永生表皮细胞(HaCaT细胞)构建细胞模型，将参试物料作用于细胞模型，通过表征参试物料作用于细胞模型所引起细胞模型中保湿因子的含量变化量，以评价参试物料的保湿功效；其中保湿因子包括吡咯烷酮羧酸、尿刊酸中的至少一种。

角质层含水量的维持依赖于角质形成细胞基质中的天然保湿因子(naturalmoisturizing factor,NMF)，它们是存在于角质层内能与水结合的一些低分子量物质的总称，通过渗透压来吸引水分子，在角质层内与水结合而维持皮肤屏障功能。其中，吡咯烷酮羧酸(PCA)与尿刊酸(UCA)都是NMF的重要组成成分。人永生化表皮细胞系来源于表皮细胞，也称为表皮角质形成细胞系，它是由角质形成细胞培育而来的，是保留了角质形成细胞分化能力的永生细胞，且NMF存在于角质形成细胞的基质中。HaCaT细胞中的PCA含量和UCA含量的变化能够准确地反应物料的保湿作用情况，由此，本发明提供的物料保湿功效的体外评价方法能够对参试物料作用于人体皮肤的保湿效果作出准确、可靠的评价，其中，由于本发明采用HaCaT细胞构建细胞模型，HaCaT细胞已成为商业化细胞株，方便购买、质量稳定，较传统的人体实验方法，细胞实验受外界环境影响较小，能节省较多的人力资源，较3D表皮模型测试方法，本发明提供的体外评价方法所需成本更低，且易于操作。

优选地，上述物料保湿功效的体外评价方法包括如下步骤：细胞裂解步骤，使HaCaT细胞裂解以获得细胞裂解液；样品液制作步骤，对细胞裂解液进行总蛋白含量定量校正，以制得待测样品液样品；样品液检测步骤，检测待测样品液中的保湿因子的含量。在本发明中，通过对细胞裂解液进行总蛋白含量定量校正，目的是排除人为剥离组织的误差性，提高检测结果的精确度。

优选地，在细胞裂解步骤中，裂解温度不高于0℃。在上述温度条件下裂解细胞，能够避免细胞中蛋白酶的作用，一方面能够使RIPA裂解液充分裂解细胞，另一方面也能够避免在细胞裂解过程中蛋白酶降解样品中的蛋白质，保证了后续对细胞裂解液中总蛋白浓度测定的准确性。

优选地，在细胞裂解步骤中，裂解的时间不低于15分钟。

优选地，裂解的时间为15-30分钟。