[发明专利]一种基于SNP突变检测技术鉴定雌鹿产品种源的引物组和试剂盒及其鉴定方法

权利要求书

1.一种基于SNP突变检测技术鉴定雌鹿产品种源的引物组，其特征在于，包括上游外引物F68、上游内引物F403w1、下游内引物R450m6和下游外引物R615，所述上游外引物F68的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述上游内引物F403w1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游内引物R450m6的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述下游外引物R615的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.一种基于SNP突变检测技术鉴定雌鹿产品种源的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组及检测试剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包括Taq酶、10×buffer、dNTP mixture、MgCl₂和ddH₂O。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述上游外引物F68、上游内引物F403w1、下游内引物R450m6和下游外引物R615在PCR体系中的终浓度独立为0.25μmol/L、0.25μmol/L、0.4μmol/L和0.25μmol/L。

5.一种利用权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的试剂盒鉴定雌鹿产品种源的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待检测雌鹿产品基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取到的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的引物组进行PCR扩增获得扩增产物；

(3)对步骤(2)得到的扩增产物进行电泳检测；当所述扩增产物有且仅有549bp和213bp两个电泳条带时，判定为纯种梅花鹿；当扩增产物有且仅有549bp和383bp两个电泳条带时，判定为纯种马鹿；当扩增产物有且仅有549bp、213bp和383bp三个电泳条带时，判定为花马鹿杂交后代；当扩增产物仅有549bp一个电泳条带时，判定为非马鹿和梅花鹿之外的鹿品种。

6.根据权利要求5所述的鉴定雌鹿产品种源的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待检测雌鹿产品包括鹿肉、鹿血、鹿心、鹿肾、鹿筋、鹿尾、鹿胎盘和鹿胎粉。

7.根据权利要求5所述的鉴定雌鹿产品种源的方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增的反应体系，以20μL计，包括以下组分：10×buffer2.0μL，25mmol/L的dNTP mixture 1.6μL，25mmol/L的MgCl₂2.0μL，10μmol/L的上游外引物F680.5μL，10μmol/L的上游内引物F403w10.5μL，10μmol/L的下游内引物R450m60.8μL，10μmol/L的下游外引物R6150.5μL，5U/μL的Taq酶0.4μL，模板DNA 3.0μL，ddH₂O 8.7μL。

8.根据权利要求5所述的鉴定雌鹿产品种源的方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增的扩增程序为：95℃预变性5～10min；94℃变性30～50s，58～65℃退火35～60s，72℃延伸40～300s，变性、退火、延伸进行30～36个循环；72℃最终延伸5～12min。