[发明专利]一种基于SNP突变检测技术鉴定雌鹿产品种源的引物组和试剂盒及其鉴定方法

说明书

本发明属于物种鉴定技术领域，提供了一种基于SNP突变检测技术鉴定雌鹿产品种源的引物组和试剂盒及其鉴定方法，包括上游外引物F68、上游内引物F403w1、下游内引物R450m6和下游外引物R615，所述上游外引物F68的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述上游内引物F403w1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游内引物R450m6的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述下游外引物R615的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。利用上述引物组可以特异地检测雌鹿制品的真伪和是否为杂交品种，并且能够判定其亲本来源，为鹿产品的真伪鉴定和杂交种鉴定提供检测技术。

技术领域

本发明涉及物种鉴定技术领域，尤其涉及一种基于SNP突变检测技术鉴定雌鹿产品种源的引物组和试剂盒及其鉴定方法。

背景技术

鹿茸具有重要的药用价值也被视为珍贵的动物药材，其中仅有梅花鹿和马鹿被视为药用鹿产品中的正统来源。梅花鹿与马鹿同为偶蹄目、鹿科、鹿属，两者的分化时间短，目前对于两者的演化关系仍无确切的定论，而当前开展的动物杂交育种技术以梅花鹿×马鹿♀组成的花马杂交在鹿茸生产中显示出了极高的经济效益，因此杂交鹿成为鹿产业中重要的基元来源。但传统中医和现代仪器分析结果均表明，杂交鹿产品在药用价值方面低于或明显与纯种梅花鹿存在差异，两者的市场价格也存在较大落差。近年来花马杂交鹿产品逐渐流入市场，更有将其视为纯种梅花鹿鹿产品进行出售而获得高利润。当前对鹿产品的检测主要是针对鹿茸的检测，多是基于DNA分析发展起来的技术，这些技术基本满足对鹿茸真伪以及亲本来源的鉴定。然而随着杂交鹿群养殖数量的增加以及出栏率的提高，杂交鹿产品逐步进入市场，如鹿肉、鹿血、鹿心、鹿肾、鹿筋和鹿尾等，这些产品从外形无法判定其性别，且当前对于雌性杂交鹿的亲本来源问题尚无法解决。

单核苷酸多态性SNP是第三代分子标记，已被广泛用于生物群体的遗传多样性分析以及分子标记辅助选择等领域。SNP位点广泛存在于人和动物基因组中，是由单个核苷酸发生变异所引起的DNA序列多态性，其物种特异性SNP位点可用于物种鉴定。SNP位点的检测方法较多，基于PCR分析的检测技术有限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)、单链构象多态性(SSCP)、PCR直接分析法、等位基因特异性扩增法以及荧光定量PCR等。此类技术对于SNP位点检测具有不同优缺点，如内切酶的使用则存在检测过程繁琐、所需时间长以及检测成本高等缺点，测序技术带来时间和经济成本的增加，都不便应用于常规检测。四引物扩增受阻突变体系PCR是一种在普通PCR水平上发展起来的用于检测各种SNP位点分型的方法，其根据每个SNP位点设计两条延伸方向相反的检测内引物以及两条对照外引物，利用四条引物扩增产物的有无和大小，可直接在电泳图谱上区分不同基因型，已在医药和经济动物育种领域开展应用，但是目前并没有利用SNP分析技术鉴定雌鹿产品种源及亲本来源的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于SNP突变检测技术鉴定雌鹿产品种源的引物组和试剂盒及其鉴定方法，所述引物组可以特异地检测雌鹿制品的真伪和是否为杂交品种，并且能够判定其亲本来源，为雌鹿产品的真伪鉴定和杂交种鉴定提供检测技术。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种基于SNP突变检测技术鉴定雌鹿产品种源的引物组，包括上游外引物F68、上游内引物F403w1、下游内引物R450m6和下游外引物R615，所述上游外引物F68的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述上游内引物F403w1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游内引物R450m6的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述下游外引物R615的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。具体如下：

F68(SEQ ID NO：1)：5'-GCTGATGCTACACACACGGATG-3'；

F403w1(SEQ ID NO：2)：5'-GTCTTGACGAGTGAATCCATACATAG-3'；