[发明专利]一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的棘胸蛙多肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抑制黄嘌呤氧化酶活性的棘胸蛙多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。

2.一种如权利要求1所示的抑制黄嘌呤氧化酶活性的棘胸蛙多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)棘胸蛙蛙皮按照料液比1g:15～25mL加蒸馏水均质，调节pH至6.5～7.5，按照蛙皮质量添加4％～6％的木瓜蛋白酶，调整酶解温度为40～50℃，酶解处理4～6h后，沸水灭酶10min；

(2)调节步骤(1)灭酶后的酶解液pH至1.0～3.0，按照蛙皮质量添加4％～6％的酸性蛋白酶，调整酶解温度为45～55℃，酶解处理4～6h后沸水灭酶10min；

(3)将步骤(2)灭酶后的酶解液离心，取上清液，经超滤和层析，得到抑制黄嘌呤氧化酶活性的棘胸蛙多肽。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，木瓜蛋白酶的酶活力≥200U/mg。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，酸性蛋白酶的酶活力≥200U/mg。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，超滤为使用截留分子量为3kD的超滤管收集分子量小于3kD的酶解产物。

6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，层析为使用Sephadex G-15凝胶色谱柱对超滤后的酶解液进行柱层析：上样浓度为20～40mg/mL，上样量2～4mL，流速980μL/min，每10min收集一管，在220nm检测并绘制吸光度曲线。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，对层析后的组分进行反相高效液相色谱纯化，反相高效液相色谱条件为：进样量10～20μL；使用C18反向色谱柱，柱温为25～30℃，流动相：A为含有0.1％三氟乙酸的水，B为乙腈，梯度洗脱：0～40min、乙腈浓度从0至50％，洗脱速度1.0mL/min；紫外检测波长280nm。

8.如权利要求1所述的棘胸蛙多肽在制备降尿酸药物中的应用。