[发明专利]一种产甾药前体的基因工程菌及其用途

权利要求书

1.基因在调控分枝杆菌产甾药前体的产量或改造产甾药前体的分枝杆菌中的用途，其特征在于，所述基因包括编码羟酰辅酶A脱氢酶的基因和/或3-甾酮-9α-羟化酶A亚基的基因。

2.如权利要求1所述的基因在调控分枝杆菌产甾药前体的产量或改造产甾药前体的分枝杆菌中的用途，其特征在于，包括如下中的1)-3)中的至少一项：

1)所述编码3-甾酮-9α-羟化酶A亚基的基因为如下A1)-A4)中的至少一项；

A1)所述基因为kshA1；所述kshA1的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.1所述序列；

A2)所述基因为kshA2；所述kshA2的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.2所述序列；

A3)所述基因为kshA3；所述kshA3的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.3所述序列；

A4)与所述SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且编码所述3-甾酮-9α-羟化酶A亚基的核苷酸；

2)所述编码羟酰辅酶A脱氢酶的基因为如下B1)或B2)；

B1)所述基因为hsd4A；所述hsd4A的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.4所述序列；B2)与所述SEQ ID NO.4所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且编码如所述羟酰辅酶A脱氢酶的核苷酸；

3)所述甾药前体选自1,4-雄烯二酮、雄烯二酮、21-羟基-20-甲基孕甾-1，4-二烯-3-酮以及21-羟基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮的一种或多种；优选地，为21-羟基-20-甲基孕甾-1，4-二烯-3-酮。

3.如权利要求1所述的基因在调控分枝杆菌产甾药前体的产量或改造产甾药前体的分枝杆菌中的用途，其特征在于，所述基因还包括编码3-甾酮-Δ¹-脱氢酶、NADH氧化酶、过氧化物酶的基因中的一种或多种。

4.如权利要求3所述的基因在调控分枝杆菌产甾药前体的产量或改造产甾药前体的分枝杆菌中的用途，其特征在于，包括如下中的1-1)、1-2)和/或1-3)：

1-1)所述编码3-甾酮-Δ¹-脱氢酶的基因为如下C1)或C2)；

C1)所述编码基因为kstd；所述kstd的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.5所述序列；

C2)与所述SEQ ID NO.5所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且编码所述3-甾酮-Δ¹-脱氢酶的核苷酸；

1-2)所述编码NADH氧化酶的基因为如下D1)-D2)中的至少一项；

D1)所述编码基因为nox；所述nox的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.6所示序列；

D2)与所述SEQ ID NO.6所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且编码如所述NADH氧化酶的核苷酸。

1-3)所述编码过氧化物酶的基因为如下E1)-E2)中的至少一项；

E1)所述编码基因为kate；所述kate的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.7所示序列；

E2)与所述SEQ ID NO7所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且编码如所述过氧化物酶的核苷酸。

5.如权利要求4所述的基因在调控分枝杆菌产甾药前体的产量或改造产甾药前体的分枝杆菌中的用途，其特征在于，所述羟酰辅酶A脱氢酶、所述过氧化物酶来源于放线菌；

和/或，所述NADH氧化酶来源于芽孢杆菌。

6.如权利要求1-5任一项所述的基因在调控分枝杆菌产甾药前体的产量或改造产甾药前体的分枝杆菌中的用用途，其特征在于，所述分枝杆菌为新金色分枝杆菌；优选地，为新金色分枝杆菌Mycobacterium.neoaurum DSM 44074。

7.一种产甾药前体的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌通过敲除分枝杆菌中编码3-甾酮-9α-羟化酶和/或羟酰辅酶A脱氢酶的基因获得。