[发明专利]Cas蛋白截短体、构建其的方法及其应用

权利要求书

1.一种Cas13蛋白，其特征在于，所述Cas13蛋白由以下(1)-(3)中的任一种组成：

(1)相对如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列存在选自第623-772位、第773-922位、第923-1072位、第623-1072位、第923-972位、第973-1022位、第1023-1072位、第973-1072位、第623-672位、第673-722位、第723-772位、第773-822位、第823-872位、第873-922位、第1127-1272位、第994-1107位、第726-827位、第263-315位、第82-132位、第187-243位、第610-661位、第593-658位和第810-905位的任一种缺失的截短体序列；

(2)同源或异源蛋白结构域，以及(1)中所述截短体序列；

(3)同源或异源蛋白结构域，(1)中所述截短体序列，以及用于连接所述蛋白结构域与所述截短体序列的连接序列。

2.如权利要求1所述的Cas13蛋白，其特征在于，所述同源或异源蛋白结构域任选自核定位信号、核输出信号、脱氨酶结构域、翻译激活结构域、翻译抑制结构域、RNA甲基化结构域、RNA去甲基化结构域、核酸酶结构域、剪接因子结构域、报告标签以及亲和标签中的一种或更多种。

3.如权利要求1所述的Cas13蛋白，其特征在于，所述蛋白结构域与所述截短体序列通过连接序列共价连接。

4.如权利要求1所述的Cas13蛋白，其特征在于，所述连接序列为氨基酸序列，所述连接序列的长度为1-100个氨基酸。

5.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的Cas13蛋白。

6.一种CRISPR-Cas13系统，其特征在于，所述CRISPR-Cas13系统包含：

如权利要求1～4任一项所述的Cas13蛋白或编码所述Cas13蛋白的多核苷酸；以及

指导多核苷酸或编码所述指导多核苷酸的核酸，所述指导多核苷酸包含连接至指导序列的同向重复序列，所述指导序列被工程化以与靶核苷酸杂交；

所述指导多核苷酸能够与所述Cas13蛋白形成CRISPR复合物。

7.一种包含权利要求6所述的CRISPR-Cas13系统的载体系统，其中，所述载体系统包含一个或更多个载体，所述载体系统包含编码所述Cas13蛋白的多核苷酸序列和编码所述指导多核苷酸的多核苷酸序列。

8.一种包含权利要求6所述的CRISPR-Cas13系统的腺相关病毒载体，其中，所述腺相关病毒载体包含编码所述Cas13蛋白和指导多核苷酸的DNA。

9.一种包含权利要求6所述的CRISPR-Cas13系统的脂质纳米粒，其中，所述脂质纳米粒包含所述的指导多核苷酸和编码所述Cas13蛋白的mRNA。

10.一种包含权利要求6所述的CRISPR-Cas13系统的慢病毒载体，其中，所述慢病毒载体包含所述指导多核苷酸和编码所述Cas13蛋白的mRNA。

11.如权利要求10所述的慢病毒载体，其中，所述慢病毒载体是用包膜蛋白假型化的。

12.一种包含权利要求6所述的CRISPR-Cas13系统的核糖核蛋白复合物，其中，所述核糖核蛋白复合物由所述指导多核苷酸和Cas13蛋白形成。

13.一种包含权利要求6所述的CRISPR-Cas13系统的病毒样颗粒，其中，所述病毒样颗粒包含由所述指导多核苷酸和Cas13蛋白形成的核糖核蛋白复合物。

14.一种真核细胞，其特征在于，所述真核细胞包含如权利要求6所述的CRISPR-Cas13系统。