[发明专利]恒温扩增检测猴痘病毒的组合物、试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种恒温扩增检测猴痘病毒的组合物，包括：

猴痘病毒通用引物对：

正向引物F：5’-ATACCTTTACATCTCACAATAATCATTTAC-3’

反向引物R：5’-CATTCACAGATTCTATTGTGAGTCGTGTTA-3’

探针P：

5’-AGGCTTGTCTAAGTTGTAACGGAAGATGTGATAGTA[THF]TCAGGTAGAGACGCG-3’；

西非分支引物对：

正向引物F：5’-AATAGATATCAGAATACTTCAAAGATATGT-3’

反向引物R：5’-TGAATGCGGCATGATAGTATCATTCTTTGT-3’

探针P：

5’-GAATTTCGAGATTAAATGTAACAACAAAGATTCATC[THF]TCCAAA CAGTTAACG-3’；

刚果金分支引物对的核酸序列为：

正向引物F：5’-GTGGGTGGATTGGACCATTCTCCTCCTGAA-3’

反向引物R：5’-ATACGAGGATTTTTATATCGATGGGAGCAT-3’

探针P：

5’-ATGACACCAGAGTTACCAATCAACGAATATCCACTA[THF]TGCAAC TATAAGTTA-3’。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括：

内源性内标引物对为：

正向引物F：5’-GTGGCGGGGAAGTCAGGTGGAGCGAGGCTA-3’

反向引物R：5’-GCAGAGGTGTGGTGGCTGTGGCATGGTGCCAAG-3’

探针P：

5’-TGCACCACCAACTGCTTAGCACCCCTGGCCAAGGTC[THF]TCCATG ACAACTTTG-3’。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物的探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述猴痘病毒通用探针的荧光基团是FAM；西非分支探针的荧光基团是CY5；刚果金分支探针的荧光基团是VIC；内标探针的荧光基团是ROX。

5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物的探针的3'末端标记修饰胺基、磷酸基团或C3-Spacer亚磷酰胺。

6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，猴痘病毒通用探针序列第35位碱基T标记荧光基团，第38位碱基T标记淬灭基团，3'末端标记修饰C3-Spacer亚磷酰胺；

西非分支探针序列第35位碱基T标记荧光基团，第38位碱基T标记淬灭基团，3'末端标记修饰C3-Spacer亚磷酰胺；

刚果金分支探针序列第35位碱基T标记荧光基团，第38位碱基T标记淬灭基团；

内标探针序列第35位碱基T标记荧光基团，第38位碱基T标记淬灭基团。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的组合物在制备恒温扩增检测猴痘病毒并分型的试剂盒中的用途。

8.一种恒温扩增检测猴痘病剂毒并分型的试剂盒，包括根据权利要求1～6中任一项所述的组合物。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：核酸释放剂、核酸提取试剂、dNTPs、缓冲液、ATP、丙酮酸激酶、PEG30000、单链结合蛋白、重组酶、核酸内切酶以及DNA聚合酶中的至少一种。

10.一种用于以非诊断目的的恒温扩增检测猴痘病毒并分型的方法，所述方法包括以下步骤：

1)提取或释放待测样本的核酸；

2)使用如权利要求1～6中任一项所述的组合物或如权利要求8～9中任一项所述的试剂盒对步骤1)获得的核酸进行恒温扩增；

3)获得并分析结果。