[发明专利]一种通过双/多顺反子表达系统调控铁蛋白在细胞内自组装的方法

权利要求书

1.一种通过双/多顺反子表达系统调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：通过双顺反子表达系统或多顺反子表达系统，将含不同组分的铁蛋白亚基单体在原核生物内自组装，得到可控组装的融合表达铁蛋白。

2.根据权利要求1所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：通过控制表达不同组分铁蛋白亚基单体的基因的顺反子个数，调控不同组分的铁蛋白亚基单体在铁蛋白笼状结构中的比例。

3.根据权利要求1或2所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：所述原核生物为大肠杆菌。

4.根据权利要求1或2所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：所述双顺反子表达系统通过双顺反子质粒构建，所述双顺反子质粒为pCDFDuet-1、pRSFDuet-1、pACYCDuet-1、pColADuet-1、

pETDuet-1或pET4CDS。

5.根据权利要求1或2所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：所述多顺反子表达系统通过双顺反子质粒和/或单顺反子质粒构建，所述双顺反子质粒和所述单顺反子质粒为具有不同抗性基因的质粒。

6.根据权利要求5所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：所述双顺反子质粒包括pCDFDuet-1、pRSFDuet-1、pACYCDuet-1、pColADuet-1、pETDuet-1、pET4CDS中的一种或多种；所述单顺反子质粒包括pET21a、pET21b、pET24a、pET28a中的一种或多种。

7.根据权利要求1-6任一项所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于所述多顺反子表达系统为三顺反子表达系统。

8.根据权利要求1-6任一项所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：双顺反子表达系统或多顺反子表达系统经过大肠杆菌单克隆筛选、表达、纯化，得到可控组装的融合表达铁蛋白。

9.根据权利要求1-8任一项所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：所述含不同组分的铁蛋白亚基单体为抗体的单链可变区片段。

10.根据权利要求1-9任一项所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1.表达质粒的构建：将融合表达铁蛋白基因和人铁蛋白重链基因分别连接到所述双顺反子质粒的第一个顺反子和第二个顺反子后面，将融合表达铁蛋白基因和人铁蛋白重链基因插入到所述单顺反子质粒的T7顺反子后面，将两种不同融合表达铁蛋白基因R1HF和R2HF连接到所述双顺反子质粒的两个顺反子后，构建表达质粒；

S2.表达菌株的构建和筛选：将S1中构建的所述表达质粒转染到大肠杆菌感受态细胞中，过夜培养后用抗生素筛选，挑选阳性菌株扩大培养，得到融合表达铁蛋白大肠杆菌原核表达菌株的菌液；

S3.融合表达铁蛋白的表达纯化：当所述融合表达铁蛋白大肠杆菌原核表达菌株的菌液的OD600为0.6-0.8时，在37℃、1mM IPTG条件下诱导表达3-5小时，将上清液超滤浓缩后经AKTA层析系统进行分离纯化，得到可控组装的融合表达铁蛋白。

11.根据权利要求10所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法，其特征在于：步骤S2中，将按照图3所示的一种或多种表达质粒的组合转染到大肠杆菌感受态细胞中。

12.根据权利要求1-10任一项所述的调控铁蛋白在细胞内自组装的方法制备得到的可控组装的融合表达铁蛋白。