[发明专利]真皮毛乳头细胞球及其体外培养方法、囊泡和用途

权利要求书

1.一种真皮毛乳头细胞球的体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

从离体真皮毛乳头组织中提取原代真皮毛乳头细胞，传代培养3～5代；

将传代培养后的真皮毛乳头细胞接种于SLF-3D培养体系中培养，待真皮毛乳头细胞生长至融合度为90～100％时，收集半悬浮的球体，将球体分离成为单个细胞，再将单个细胞重新接种到原SLF-3D培养体系中培养3～5d，收集形成的悬浮球体，即为真皮毛乳头细胞球_；

其中，所述SLF-3D培养体系是以DEME/F-12作为溶剂，以所述SLF-3D培养体系的总体积计，所述SLF-3D培养体系还包括以下原料：2～3％胎牛血清_、人碱性成纤维细胞生长因子4～6ng/mL、人表皮生长因子0.8～3ng/mL、人血小板衍生生长因子4～6ng/mL、肝素1～3ug/mL、L-抗坏血酸-2-磷酸倍半钠水合物30～60ug/mL、青霉素80～120U/mL。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述真皮毛乳头细胞在SLF-3D培养体系中的接种量为5～6×10⁴个/cm²。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以所述SLF-3D培养体系的总体积计，所述SLF-3D培养体系包括以下原料：3％胎牛血清_、人碱性成纤维细胞生长因子5ng/mL、人表皮生长因子2ng/mL、人血小板衍生生长因子5ng/mL、肝素2ug/mL、L-抗坏血酸-2-磷酸倍半钠水合物50ug/mL、青霉素100U/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，原代真皮毛乳头细胞的提取是采用显微分离结合改良酶消化法从离体鼠触须末端毛球部提取得到。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述传代培养的具体培养过程为：先将所述原代真皮毛乳头细胞接种到含20％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液中培养_，待生长融合度为80～90％时，传代，此后更换为含10％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液继续培养。

6.一种根据权利要求1～5任一项所述的方法得到的真皮毛乳头细胞球。

7.一种权利要求6所述真皮毛乳头细胞球的细胞外囊泡，其特征在于，其是按照以下方法制备得到：将所述真皮毛乳头细胞球在装有DMEM/F-12培养液的超低黏附培养皿中培养24h后，收集培养上清液，离心，即得。

8.一种权利要求6所述的真皮毛乳头细胞球或权利要求7所述的细胞外囊泡在制备抑制瘢痕形成和/或促进皮肤附属器再生和/或促进血管新生的产品中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，

所述真皮毛乳头细胞球或所述细胞外囊泡用于制备促进角质形成细胞增殖和/或迁移的产品；

所述真皮毛乳头细胞球或所述细胞外囊泡用于制备促进成纤维细胞增殖和/或迁移的产品；

所述真皮毛乳头细胞球或所述细胞外囊泡用于制备促进血管内皮细胞增殖和/或迁移的产品。

10.一种抑制瘢痕形成和/或促进皮肤附属器再生和/或促进血管新生的产品，其特征在于，其包括权利要求6所述真皮毛乳头细胞球和/或权利要求7所述的细胞外囊泡。