[发明专利]用于检测PEDV的免疫生物传感器及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种用于检测PEDV的免疫生物传感器及其制备方法和应用，涉及病原快速检测领域。该免疫生物传感器包括电极基材、氧化石墨烯层、壳聚糖层、猪流行性腹泻病毒单克隆抗体层；氧化石墨烯层、壳聚糖层、猪流行性腹泻病毒单克隆抗体层依次层叠覆盖于电极基材。该免疫生物传感器针对PEDV的检测具有优异的灵敏性、精确性和特异性。

技术领域

本发明涉及病原快速检测领域，特别是涉及一种用于检测PEDV的免疫生物传感器及其制备方法和应用。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)是PED的主要病原体，是一种有囊膜的RNA病毒，属于冠状病毒科、α冠状病毒属的成员。PEDV可感染许多年龄段的猪，但主要引起新生仔猪出现腹泻、呕吐、厌食、脱水和体重减轻等症状，7日龄以下仔猪病死率甚至可达100%。PEDV于1978年由Pensaert等于比利时首次分离，随后传播至许多国家及地区，并造成了严重经济损失，目前对于PEDV主要的防控手段为接种疫苗，由于缺乏相应的治疗药物，因此，及时地检测PEDV是防控该病的前提和基础。建立一种快速、准确、易操作、成本低廉的检测方法将有利于在生产实践中及早诊断和控制该病的流行。

目前，目前用于PEDV的检测的方法主要包括病毒分离鉴定、实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）、酶联免疫吸附试验（Enzyme LinkedImmunosorbent Assay，ELISA）等。

病毒分离鉴定是最为准确、可靠的病毒检测方法，是病毒检测的“金标准”，也是最早出现的病毒检测方法。该方法首先采集病料，并使用细胞或鸡胚进行病毒培养分离，随后对病毒进行毒力测定、理化性质测定等以确诊病毒。该方法检测的准确率高，但检测周期长，操作繁琐、成本高昂，且对操作人员的素质有着较高的要求，不适用于实际生产中的大范围应用及推广。

实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）具有灵敏性高、检测时间短等的特点，其基本原理是在体外核酸扩增过程中，加入可插入核酸序列中的荧光物质，随着扩增的不断进行，荧光物质的数量不断增加，通过荧光信号的强弱以检测病毒的数量。该方法是目前使用最广泛的方法之一，相较于聚合酶链式反应（Polymerase ChainReaction，PCR），其进一步地提高了灵敏性，高效且省时，但其检测设备及试剂较为昂贵，且容易污染出现假阳性的结果，对操作人员的素质要求高。

酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）具有操作简便、试验条件要求较低的特点，而被广泛应用于数量较多的样品的检测。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合，预先在固相载体上固定抗原，或抗体，在抗原抗体结合后通过肉眼观察沉淀或使用酶标仪来判定检测结果。ELISA相较于qPCR等的分子生物学诊断方法成本较低，对于试验条件要求较低，操作简单。但其检测的灵敏度较差，孵育时间长等缺点。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种用于检测PEDV的免疫生物传感器，该免疫生物传感器针对PEDV的检测具有优异的灵敏性、精确性和特异性。

为了达到上述目的，本发明提供了一种用于检测PEDV的免疫生物传感器，该免疫生物传感器包括电极基材、氧化石墨烯层、壳聚糖层、猪流行性腹泻病毒单克隆抗体层；所述氧化石墨烯层、所述壳聚糖层、所述猪流行性腹泻病毒单克隆抗体层依次层叠覆盖于所述电极基材。

免疫生物传感器具有制备成本低、操作简单等特点，仅需简单的培训后即可使用，更适用于实际生产中的应用。因此，本发明人为利用抗原抗体特异性结合的特点，对PEDV进行检测，在工作电极上固定修饰材料以提高传感器检测性能，随后在工作电极上固定抗体，通过抗原抗体结合后传感器检测的电流变化以进行检测。