[发明专利]一种鹿角脱盘蛋白及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种鹿角脱盘蛋白，其特征在于，所述蛋白的二级结构为：α-螺旋14.64％、β-折叠47.65％、β-转角24.43％和无规则卷曲结构13.28％。

2.根据权利要求1所述的一种鹿角脱盘蛋白，其特征在于，所述蛋白的分子量为65.5kDa。

3.根据权利要求1所述的一种鹿角脱盘蛋白，其特征在于，所述蛋白包括特异性肽段序列GSGGGSSGGSIGGR的高置信度蛋白KRT1。

4.根据权利要求1或者2所述的鹿角脱盘蛋白在制备抗乳腺增生药物中的应用。

5.一种鹿角脱盘蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

(1)对鹿角脱盘的水提物通过硫酸铵结合等电点处理后，得到鹿角脱盘蛋白粗提物；

(2)将所述鹿角脱盘蛋白粗提物依次进行离子交换层析和凝胶过滤层析进行纯化后，得到鹿角脱盘蛋白。

6.根据权利要求4所述的一种鹿角脱盘蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述水提取的具体步骤为：在鹿角脱盘粉末加入料液比为1:25的蒸馏水，加热至52℃，磁力搅拌2.9h，连续提取两次，合并其上清液即为水提物。

7.根据权利要求4所述的一种鹿角脱盘蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述硫酸铵结合等电点处理的具体步骤为：

1)在所述水提物中加入(NH₄)₂SO₄使其饱和度达到50％，将此溶液放置4℃环境中静置10-12h得到蛋白悬浮液，离心弃去沉淀；向弃去沉淀后的上清液继续加入(NH₄)₂SO₄至其饱和度达到80％，将此溶液放置4℃环境中静置10-12h得到蛋白悬浮液，离心取沉淀，得到鹿角脱盘蛋白沉淀物；

2)在所述鹿角脱盘蛋白沉淀物中加入超过所述蛋白等电点1.5-2.0个单位的0.05MTris-HCl缓冲溶液至沉淀完全溶解，透析除盐，冷冻干燥得鹿角脱盘蛋白粗提物。

8.根据权利要求1所述的一种鹿角脱盘蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述离子交换层析的具体步骤为：将所述鹿角脱盘蛋白粗提物采用纤维素离子交换层析柱，以缓冲液溶液0.02MTris-HCl-(0、0.05、0.1、0.2、0.3)mol/LNaCl溶液依次梯度洗脱，流速为1.0mL/min，回收分离第一个峰，得到第一洗脱组分。

9.根据权利要求7所述的一种鹿角脱盘蛋白的制备方法，其特征在于，所述鹿角脱盘蛋白粗提物的浓度为20mg/mL。

10.权利要求7所述的一种鹿角脱盘蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述凝胶过滤层析的具体步骤为：将所述第一洗脱组分采用凝胶过滤层析柱，以缓冲液溶液0.02MTris-HCl溶液洗脱，流速0.4mL/min，回收洗脱液，即得鹿角脱盘蛋白，其中所述第一洗脱组分的浓度为12mg/ml。