[发明专利]一种提升乳酸菌耐酸性的方法

说明书

本发明公开了一种提升乳酸菌耐酸性的方法。该方法为：将启动子和如SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2所示的目的基因插入至乳酸菌中表达即可。本发明发现通过代谢工程，采用精氨酸脱亚胺酶基因和氨基甲酸激酶基因来改造乳酸菌胞内的精氨酸脱亚胺酶途径，可以有效的提高乳酸菌在酸胁迫环境下的存活率。相对于乳酸菌NZ9000原始菌株而言，重组菌株在酸胁迫下的存活率提高了1.25倍和1.51倍。

技术领域

本发明属于基因工程和微生物技术领域，具体涉及一种提升乳酸菌耐酸性的方法。

背景技术

乳酸菌所具有的益生作用以及提高食品质量和安全等功能，使其在人类的生活中具有不可忽视的作用。如嗜盐四联球菌具备缩短发酵周期和提高发酵品质的优良特性，尤其在提升食品中风味物质，以此被广泛应用与高盐传统食品发酵，如酱油、鱼酱、豆制品等。

但是由于乳酸菌的产酸特性，酸型性环境是乳酸菌无法避免的胁迫问题，这会导致细胞包内的代谢紊乱，严重的造成细胞细胞膜的损伤甚至造成细胞死亡。因此，亟需开发一种可提升乳酸菌酸胁迫耐受性的方法

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种提升乳酸菌耐酸性的方法，可有效提升乳酸菌的酸胁迫耐受性。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种提升乳酸菌耐酸性的方法，将启动子和如SEQ ID NO.1和/或SEQ IDNO.2所示的目的基因插入至乳酸菌中表达即可。

进一步地，同时将Pnis启动子，如SEQ ID NO.1所示的精氨酸脱亚胺酶基因，和如SEQ ID NO.2所示的氨基甲酸激酶基因转化至乳酸菌中，Pnis启动子的核酸序列如SEQ IDNO.3所示。具体如下如下：

精氨酸脱亚胺酶基因(SEQ ID NO.1)

ATGAGTATGCCAATTAATGTTTTTTCAGAAATAGGTCCACTTAAAACAG

TTATGTTACACCGTCCGGGAAAAGAACTAGGAAATTTAATGCCTGATTATTT

AAAGCGATTATTATTTGATGATATCCCCTTTTTAGAGCAGGCACAAAAAGA

ACATGATTATTTCGCTGAAATTCTACGAAAAAAGGAAATAGAGGTCTTATAT

TTAGAAGATTTAGCAGCGGACTCATTAAAAAATGAAAAAATCCGTGCTCAA

TTTATTAATCAATATTTAGCAGAAGCACATATCCATAGTCAAAAATTAAGAG

AAAAAGTAAAAATAATGCTAAGTGAAATTGCGGATAATCGTGAACTGATTG

ACAAAACGATTGCAGGAATTCAAAAAGTAGAGCTGGCAGGATATACAGCG

GAAAGCTTGTCAGACATGATAGAAAGTGACTATCCATTCATCATTGATCCGA

TGCCTAATCTATATTTTACACGAGATAATTTTGCTACTATAGGGAATGGCATT

TCTTTGAACCATATGTATTCAGCCACTAGACAAAGAGAAACAATTTATGGG

GAGTATATTTTTGCTTATCATCCTCGTTTTGCTAGAAAAAAAGTACCGAAAG

TTTATGATCGTAATGAAACAACACGTATTGAAGGTGGCGATGAGCTGGTAC