[发明专利]一种鉴定圆果杜英的DNA条形码、鉴定方法与应用

权利要求书

1.一种鉴定圆果杜英的DNA条形码，其特征在于，所述DNA条形码包括ycf1、trnS-atpA和ITS基因序列中的一种或多种；所述ycf1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述trnS-atpA的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述ITS的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.一种鉴定圆果杜英的引物组，其特征在于，所述引物组包括ycf1引物、trnS-atpA引物和ITS引物中的一种或多种；所述ycf1的引物序列如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示，所述trnS-atpA的引物序列如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示，所述ITS的引物序列如SEQ IDNo.8和SEQ ID No.9所示。

3.一种鉴定圆果杜英的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR扩增反应体系，所述PCR扩增反应体系包括DNA模板2μL，10×DreamTaqGreenbuffer5μL，dNTPMix5μL，DMSO2μL，BSA0.5μL，正向引物2μL，反向引物2μL，DreamTaq DNAPloymrerase1.5μL，双蒸水加至50μL。

5.权利要求1所述的DNA条形码、权利要求2所述的引物组或权利要求3或4所述的试剂盒在鉴定圆果杜英中的应用。

6.一种圆果杜英的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取样品的总DNA，以总DNA为模板，PCR扩增ycf1、trnS-atpA、ITS基因片段，然后对ycf1、trnS-atpA、ITS基因片段测序结果进行拼接，获得联合基因片段，构建样品的联合基因片段BI树，根据BI树判断该样品是否为圆果杜英。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，如果待测样品联合基因片段单独分类出一个大分支，则该样品为圆果杜英。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应体系包括DNA模板2μL，10×DreamTaqGreenbuffer5μL，dNTPMix5μL，DMSO2μL，BSA0.5μL，正向引物2μL，反向引物2μL，DreamTaqDNAPloymrerase1.5μL，双蒸水加至50μL；所述PCR扩增程序为：95℃预变性3分钟；95℃变性30秒，52℃退火30秒，72℃扩增1分钟，共30个循环；72℃终扩增10分钟。