[发明专利]一种筛选高产DHA裂殖壶菌的方法及其应用

权利要求书

1.一种筛选高产DHA裂殖壶菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：挑取潜在高产诱变菌株于48深孔板进行初筛发酵培养，得到裂殖壶菌菌悬液；在含有二甲基亚砜溶液的96深孔板中依次添加所述裂殖壶菌菌悬液和尼罗红染液，测定OD₆₆₀以及水浴染色后测定的裂殖壶菌荧光强度FI，选择FI/OD₆₆₀最大的菌株便可得到拟高产菌株；

将所述拟高产菌株添加到48深孔板中进行复筛发酵培养，通过测定所述发酵产物中的DHA含量即可筛选得到高产DHA的裂殖壶菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述深孔板包括发酵孔和盖板；所述盖板包括上、中、下三层，所述上层为不锈钢板，所述中层为硅胶垫，所述下层为滤膜材料。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵孔的体积为2.2-7mL。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述不锈钢板和硅胶垫上均匀分布有透气孔，所述透气孔的孔径为1.5-6mm；所述滤膜材料的孔径为0.22μm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述潜在高产诱变菌株由诱变后的裂殖壶菌涂布于含有抑制剂的固体筛选培养基筛选所得。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述含有抑制剂的固体筛选培养基包括如下质量浓度的组分：葡萄糖5.0％、蛋白胨0.2％、酵母粉0.5％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.05％、海水晶2.0％、琼脂2％、三氯生0.0002895％、精恶唑禾草灵0.036178％、碘乙酸0.005％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水浴在暗处进行，所述水浴的温度为45℃，时间为20min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述初筛培养的条件为：温度25℃条件下，200r/min培养28小时。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复筛发酵培养的培养基包括如下质量浓度的组分：葡萄糖10％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.05％、酵母浸粉1.5％、蛋白胨0.5％、硫酸钠0.3％、硝酸钠0.3％。

10.权利要求1-9任意一项所述的方法在裂殖壶菌育种中的应用。