[发明专利]波茨坦短芽孢杆菌HHL-001及其应用

说明书

本发明提供了一种波茨坦短芽孢杆菌HHL‑001及其应用，属于微生物技术领域。所述波茨坦短芽孢杆菌HHL‑001保藏于中国典型培养物保藏，保藏编号为CCTCC M 20221275。本发明提供的茨坦短芽孢杆菌HHL‑001能够生产愈创木酚、对乙烯基愈创木酚、柠檬酸和乳酸，将其用于白酒中能够提高白酒中的挥发性组分和功能性组分，从而有利于提高白酒的风味和品质，并提高白酒的优品率。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体而言，涉及一种波茨坦短芽孢杆菌HHL-001及其应用。

背景技术

愈创木酚是一种挥发性酚类化合物，又称邻甲氧基苯酚，无色或淡黄色晶体,或淡黄色油状液体,具有特有的尖刺的木香和药香香气,带酚类的特殊气息，其是决定白酒、啤酒、葡萄酒和酱油等食品品位及质量的一个重要风味物质。同时，其不仅可以作为白酒等中的重要风味物质，也能作为一种天然自由基清除剂而被大家视为重要健康因子，其具有促进微循环，增强人体免疫力的作用，且可抗氧化和预防心血管等多种疾病的发生。

目前，化学合成法是生产愈创木酚的常用方法，但随着人们对绿色食品要求的日益提高，利用生物技术生产愈创木酚的方法因具有产品绿色天然、安全可靠、反应条件温和、环境污染小等优点而逐渐受到人们的重视。我国是白酒生产大国，随着菌种筛选、诱变等技术的成熟，我国各地区先后筛选出了可应用于实际生产愈创木酚的菌株。随着菌种筛选技术的不断成熟，菌种库的不断扩大，越来越多的高产愈创木酚的菌株被进一步研究，但目前的高产愈创木酚的菌株的数量仍在少数，并且现有的菌株存在菌种活力不稳定的问题，十分影响菌株产愈创木酚的能力。

发明内容

本发明旨在解决现有技术中产愈创木酚的菌株的数量少，以及现有的产愈创木酚的菌株存在菌种活力不稳定的问题，提供一株波茨坦短芽孢杆菌HHL-001，并提供了该菌株在白酒发酵等领域的应用。

为解决上述问题，本发明第一方面提供一株波茨坦短芽孢杆菌HHL-001，保藏编号为CCTCC M 20221275，于2022年8月15日保藏于湖北省武汉市武昌区武汉大学中国典型培养物保藏中心。

本发明第二方面提供一种茨坦短芽孢杆菌HHL-001的筛选方法，包括如下步骤：

配制清香型白酒大曲的菌悬液；

将所述菌悬液梯度稀释后，得到稀释液，将所述稀释液均匀涂布于固体培养基上培养，根据所述固体培养基上菌落的形态和透明圈，挑选目标菌落，将所述目标菌落进行划线纯化，制备得到纯化后的单菌落；

从所述单菌落中筛选出透明圈最大的菌株，并将所述透明圈最大的菌株接种于半固态发酵培养基中，培养完成后，筛选出愈创木酚产量最高的菌株，保藏备用，得到所述茨坦短芽孢杆菌HHL-001。

进一步地，所述根据所述固体培养基上菌落的形态和透明圈，挑选目标菌落包括：先挑选所述固体培养基上有明显透明圈的菌落，再挑选出不同形态的菌落，作为目标菌落。

进一步地，所述从所述单菌落中筛选出透明圈最大的菌株包括：将所述单菌落单独点至所述固体培养基中培养，并测量各菌的透明圈比值，选取透明圈最大的菌株。

进一步地，所述固体培养基包括：牛肉膏1.25g/250mL、蛋白胨2.5g/250mL、氯化钠1.25g/250mL、琼脂5g/250mL和脱脂奶粉6.25g/250mL、制霉菌素500μL/250mL，所述固体培养基为自然pH。

进一步地，所述稀释液在所述固体培养基上的培养温度为35℃～37℃，培养时间为24h～48h。

进一步地，所述半固态发酵培养基包括：高粱50g、淀粉酶(4万μ/g)0.25g、糖化酶(10万μ/g)2g和水60mL，所述半固态发酵培养基为自然pH，所述半固态发酵培养基的糖度为8BX至10BX。