[发明专利]一种低氧诱导分泌乳酸氧化酶的大肠杆菌工程菌及其应用

权利要求书

1.一种低氧诱导分泌乳酸氧化酶的大肠杆菌工程菌，其特征在于，将载有低氧诱导启动子、分泌肽基因和乳酸氧化酶基因的质粒导入大肠杆菌内得到所述大肠杆菌工程菌，所述低氧诱导启动子在低氧条件下被激活，启动乳酸氧化酶基因的表达，并由分泌肽基因编码的蛋白介导乳酸氧化酶转运至胞外间质。

2.如权利要求1所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述低氧诱导启动子为来源于猪霍乱沙门菌(Salmonella Choleraesuis)C500的厌氧诱导启动子PSnirB，分泌肽基因为来源于果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)的分泌肽基因pelB，乳酸氧化酶基因为来源于海豚链球菌(Streptococcus iniae)的乳酸氧化酶基因lcto。

3.如权利要求2所述的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述低氧诱导启动子的序列如SEQ ID NO.1所示，分泌肽基因序列如SEQ ID NO.3所示，乳酸氧化酶基因序列如SEQ IDNO.2所示。

4.如权利要求1～3任一所述的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建含有低氧诱导启动子序列、分泌肽基因序列和乳酸氧化酶基因序列的原核表达质粒；

(2)将含有低氧诱导启动子序列、分泌肽基因序列和乳酸氧化酶基因序列的原核表达质粒转化到大肠杆菌中，得到所述大肠杆菌工程菌。

5.如权利要求4所述的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，所述转化的方式为热激法。

6.如权利要求4所述的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，所述原核表达质粒为pET-20b(+)质粒。

7.如权利要求1～3任一所述的大肠杆菌工程菌在制备用于治疗具有低氧气特性的肿瘤或坏疽的药物中的应用。

8.一种药物，其特征在于，活性成分含有权利要求1～3任一所述的大肠杆菌工程菌。