[发明专利]一种防治烟草青枯病的放线菌固态菌剂及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种防治烟草青枯病的放线菌固态菌剂及其制备方法和应用，属于植物病害生物防治技术领域。本发明所制备的防治烟草青枯病的放线菌固态菌剂富含抗青枯病作用的放线菌，可调控根际土壤微生物群落结构，抑制青枯病病原菌的活性，不仅高效，而且不会像化学防治法对环境造成污染。本发明通过将拮抗放线菌株发酵得到的发酵液通过离心‑干燥的方式，制备微生物固态菌粉，通过多孔载体的构建，有效延长菌种保存期限，利用运输和施用，且抗逆性强。

技术领域

本发明涉及植物病害生物防治技术领域，特别涉及一种防治烟草青枯病的放线菌固态菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

烟草属于我国重要的经济作物，对地方经济发展具有突出的作用。烟草生长发育过程决定烟叶产量和品质，也是人们有效调控和干预烟草生长的重要时期。烟草青枯病又称黏液病、烟瘟、半边疯，是由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearm)侵染引起的，该病菌株系表现型与基因型多样化，对环境适应能力强，可感染250多种植物。国内外学者对烟草青枯病的防治开展了广泛的研究，涉及栽培管理、抗病品种选育、化学药剂防治和生物防治等方面。化学药剂防治仍是控制烟草青枯病的主要技术手段而采用化学药剂防治效果不突出，且容易造成农药残留和环境污染，但栽培抗病品种所需周期长投入实际成本高并且易受环境因素的影响，而微生物菌剂不仅可以给作物提供生长所需要的营养物质，还可以分泌抗生素类物质，抑制土壤中的病菌，并且会与土壤中的微生物相互作用，争夺其他病菌的生存空间，抑制病菌的生长，增强作物的抗病能力。生物防治方法是解决土传病害的一种高效、环保的防治途径，其中，微生物菌剂是生物防治的重点方向，而拮抗菌株常被制成微生物菌剂。因此，拮抗放线菌的分离筛选对烟草生产和生态环境保护意义重大。

现行的根系微生物菌剂多为液体菌剂，是菌种经过发酵后直接灌装的液体菌剂。例如，中国发明专利CN104560827B中公开了一种防治烟草青枯病的放线菌菌株及其应用，主要通过将链霉菌发酵制成菌株发酵液，作为生防菌剂；在CN106754563A中公开了一种防治烟草青枯病的微生物组合物及用途，主要采用3株放线菌属细菌组合物来防治青枯病，改善烟草农艺性状。以上专利均以液体菌剂形式来防治青枯病，但液体菌剂随着储存时间延长，菌剂活性及促生效果会显著下降，并由于缺氧及寡营养环境，微生物中会产生次生物质，对根系发育起到相反效果；一般固体载体对液体菌剂的活性存在影响，且液体菌剂的储存和运输成本高。

因此，本申请设计了一种防治烟草青枯病的放线菌固态菌剂及其制备方法和应用，利用生物兼容性的载体制备微生物固态菌粉，不仅可以有效延长菌种的保存期限，也便于运输和使用，其活性也不会受到影响。

发明内容

本发明提供了一种防治烟草青枯病的放线菌固态菌剂及其制备方法和应用，其目的是为了解决背景技术存在的上述问题。

为了达到上述目的，本发明的实施例提供了一种防治烟草青枯病的放线菌固态菌剂的制备方法，包括如下步骤：

S1、采集烟田根围土壤；

S2、取土壤样品加水，搅拌混匀，静置取上清液，稀释至不同浓度，将不同浓度土壤溶液均匀涂布于高氏1号培养基平板上，分离获得纯化放线菌株；

S3、将所述纯化放线菌株采用平板对峙法筛选出具有青枯病原菌拮抗作用的放线菌菌株；

S4、将所述具有青枯病原菌拮抗作用的放线菌菌株用高氏1号液体培养基传代培养，再接种到发酵培养基中进行高密度发酵扩大培养以获得液体菌种，再通过管式离心机进行固液分离，获得放线菌菌泥；

S5、将所述放线菌菌泥与改性淀粉吸附载体混合，并添加冷冻保护剂，冷冻干燥，获得放线菌固态菌剂。