[发明专利]一种鉴定果桑品种‘粤椹33’的分子标记引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴定果桑品种‘粤椹33’的SSR分子标记，其特征在于，包括SSR分子标记M21899、M3858和/或M641；所述的SSR分子标记M21899的重复基序为(CAA)n，其中n≥5，其右侧序列如SEQ ID NO.8所示，其左侧序列如SEQ ID NO.7所示；所述的SSR分子标记M3858的重复基序为(AG)n，其中n≥7，其右侧序列如SEQ ID NO.10所示，其左侧序列如SEQ ID NO.9所示；所述的SSR分子标记M641的重复基序为(CT)n，其中n≥9，其右侧序列如SEQ ID NO.12所示，其左侧序列如SEQ ID NO.11所示。

2.一种用于鉴定果桑品种‘粤椹33’的SSR分子标记的核心引物组，其特征在于，包括针对SSR分子标记M21899的引物、针对SSR分子标记M3858的引物和/或针对SSR分子标记M641的引物：

所述的针对SSR分子标记M21899的引物：

M21899-F： 5’- ATGGTCTTGAGGAGATTAAGCAG -3’；

M21899-R：5’- GACCCTCTCCTCTGTCTTGTTTT -3’；

所述的引物M21899-F的5’端标记有荧光报告基团；

所述的针对SSR分子标记M3858的引物：

M3858-F：5’- AAAGGAAGGAAAACACCAGAATC-3’；

M3858-R：5’- TTTTCTTATCTCCCAAACACCAC-3’；

所述的引物M3858-F的5’端标记有荧光报告基团；

所述的针对SSR分子标记M641的引物：

M641-F：5’- GTTAGGAACTGGACAGTGGCTTT-3’；

M641-R：5’- GGGGTTGTGTTTAGAGACTTTGA-3’；

所述的引物M641-F的5’端标记有荧光报告基团。

3.根据权利要求2所述的用于鉴定果桑品种‘粤椹33’的SSR分子标记的核心引物组，其特征在于，所述的荧光报告基团为FAM、HEX、TAMRA或ROX。

4.一种用于鉴定果桑品种‘粤椹33’的快速检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求2或3所述的SSR分子标记的核心引物组。

5.一种利用SSR分子标记鉴定果桑品种‘粤椹33’的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测果桑样品的基因组DNA；

（2）以步骤（1）提取的基因组DNA为模板，分别利用权利要求2或3所述的引物对M21899-F/M21899-R、M3858-F/ M3858-R和/或M641-F/ M641-R进行PCR扩增；

（3）对步骤（2）中的PCR扩增产物进行分型，对分型结果进行条带判别；若以引物对M21899-F/M21899-R为引物扩增得到的PCR扩增产物只有106 bp 一条特异性条带，以引物对M3858-F/M3858-R为引物扩增得到的PCR扩增产物只有160 bp和170bp 两条特异性条带，以引物对M641-F/M641-R为引物扩增得到的PCR扩增产物只有108 bp和122bp 两条特异性条带，则表明待测果桑样品为‘粤椹33’，否则，则表明待测果桑样品为非‘粤椹33’。

6.根据权利要求5所述的利用SSR分子标记鉴定果桑品种‘粤椹33’的方法，其特征在于，步骤（2）所述的PCR扩增，其反应体系为20 μL，包括：50 ng/μL DNA模板0.5 μL、10×PCRbuffer 2 μL、25 mM MgCl₂ 2 μL、10 mM dNTPs 0.5 μL、5 U/μL Taq DNA聚合酶0.2 μL、10μM上游引物0.5 μL、10 μM下游引物0.5 μL和ddH₂O 13.8 μL；步骤（2）所述的PCR扩增，其反应程序为：95℃预变性5 min；95℃变性30 s，60℃退火30 s，每个循环降1℃，72℃延伸30s，循环10次；94℃变性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸30 s，循环30次；最后72℃延伸5 min。

7.权利要求2或3所述的核心引物组或权利要求4所述的快速检测试剂盒在鉴定果桑品种‘粤椹33’中的应用。