[发明专利]一种骨髓基质干细胞冻存液及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种骨髓基质干细胞冻存液及其制备方法和应用，每100ml所述骨髓基质干细胞冻存液包括：乙二醇8～12ml、猴头菇多糖1～2g、黄芩苷0.2～0.8g、羟乙基淀粉2～5g、乙酰胺1～3g、维生素C 0.1～0.3g、谷胱甘肽1～3g、青霉素0.2～0.5g、DMSO 5～8g，余量为DMEM培养基。本发明骨髓基质干细胞冻存液中通过猴头菇多糖以及黄芩苷的添加，能够保持骨髓基质干细胞活力，更好的维持长期冻存细胞后的存活率和分化能力，相比现有冻存液，显著提高了骨髓基质干细胞长期冻存复苏后细胞存活率以及分化能力。

技术领域

本发明涉及细胞冻存液技术领域，具体涉及一种骨髓基质干细胞冻存液及其制备方法和应用。

背景技术

骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell)，是指成体骨髓中的一类多能干细胞。具有分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和其他几种结缔组织细胞(如腱细胞)的潜能，亦可转分化成心肌细胞、骨骼肌细胞；因此，骨髓基质干细胞的应用越来越广泛。

骨髓基质干细胞在体外经过连续培养、冻存和复苏后仍具有分化潜能，在组织损伤修复中具有重要作用，因此，研究一种能够长期有效冻存骨髓基质干细胞并维持其优异的分化能力尤为关键。

目前，骨髓基质干细胞的冻存液一般采用二甲基亚砜、培养基、血清进行细胞冻存，但现有冻存液对骨髓基质干细胞的冻存效果并不理想，细胞存活率偏低。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种骨髓基质干细胞冻存液及其制备方法和应用，该骨髓基质干细胞冻存液能够长期保存骨髓基质干细胞，并具有较高的细胞存活率。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明第一方面提供了一种骨髓基质干细胞冻存液，每100ml所述骨髓基质干细胞冻存液包括：

乙二醇8～12ml、猴头菇多糖1～2g、黄芩苷0.2～0.8g、羟乙基淀粉2～5g、乙酰胺1～3g、维生素C 0.1～0.3g、谷胱甘肽1～3g、青霉素0.2～0.5g、DMSO 5～8g，余量为DMEM培养基。

优选地，每100ml所述骨髓基质干细胞冻存液包括：

乙二醇10ml、猴头菇多糖1.5g、黄芩苷0.5g、羟乙基淀粉3g、乙酰胺2g、维生素C0.2g、谷胱甘肽2g、青霉素0.3g、DMSO 6.5g，余量为DMEM培养基。

本发明第二方面提供一种上述骨髓基质干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将乙二醇、羟乙基淀粉、乙酰胺、维生素C、谷胱甘肽和青霉素溶解于DMEM培养基中，过滤除菌，得到混合物；

(b)将猴头菇多糖和黄芩苷溶解于混合物，再次过滤除菌，即得所述骨髓基质干细胞冻存液。

本发明第三方面提供了一种上述骨髓基质干细胞冻存液在骨髓基质干细胞冻存中的应用。

本发明第四方面提供了一种骨髓基质干细胞的冻存方法，采用上述骨髓基质干细胞冻存液进行冻存。

优选地，所述冻存液中骨髓基质干细胞的浓度为(1～20)×10⁶个/ml。

优选地，所述冻存液中骨髓基质干细胞的浓度为1×10⁷个/ml。

优选地，所述冻存方法包括如下步骤：

将骨髓基质干细胞接种至所述冻存液中，先在0～4℃放置10～20min，再在﹣15℃预冻1～2h，然后，以2～4℃/min降温至﹣80℃并保持2～5h，最后，转移至液氮中保存。

优选地，所述冻存方法包括如下步骤：