[发明专利]重塑肿瘤表面糖苷的膜融合脂质体及其制备方法和抗肿瘤应用

说明书

本申请属于生物医药技术领域，尤其涉及重塑肿瘤细胞表面糖苷的膜融合脂质体及其制备方法和抗肿瘤应用。本申请提供了重塑肿瘤表面糖苷的膜融合脂质体，由内核和外壳组成，包括：所述内核包括可负载疏水药物的纳米材料，和负载在所述纳米材料中的肿瘤表面自然杀伤细胞(NK)抑制型糖苷清除剂；所述外壳由磷脂结构脂质、阳离子功能脂质和NK激活型糖苷修饰的聚乙二醇功能化脂质组成。本申请提供的膜融合脂质体，可与肿瘤细胞融合，根据不同种类糖苷功能化药物的机理将其分别递送至肿瘤细胞质中和细胞膜上，进而多通路协同编辑肿瘤细胞表面糖信号，可直接激活NK细胞识别与杀伤作用，并解除肿瘤对NK细胞的免疫活性的抑制作用。

技术领域

本申请属于生物医药技术领域，尤其涉及重塑肿瘤表面糖苷的膜融合脂质体及其制备方法和抗肿瘤应用。

背景技术

自然杀伤(Natural killer,NK)细胞疗法是利用外源或内源性NK细胞的强大免疫力来识别和杀死肿瘤。这种肿瘤治疗方式已被广泛用于临床前各种血液学和实体肿瘤的临床研究。然而，肿瘤细胞表面上NK相关配体分子往往会发生异常突变，造成对这类疗法的免疫耐受。膜表面糖苷分子是其中一种呈现在肿瘤表面上的NK相关信号分子。他可以调节NK细胞对肿瘤的免疫识别和细胞毒性。肿瘤细胞在恶性转化期间，不仅可以减少NK激活型糖苷水平，还会上调将免疫抑制型糖类的表达，导致肿瘤不易被NK识别并抑制NK的激活，从而耗竭NK的细胞毒性以降低NK疗法的治疗效果。因此，重塑肿瘤细胞表面糖苷是激活NK介导的识别和细胞毒性来抑制肿瘤的有效策略。

近年来，纳米材料逐渐被开发用于递送一种或多种糖苷功能化药物至肿瘤，使其作用于相关靶点来实现对肿瘤表面糖苷的安全高效的编辑。然而，传统的纳米材料只能将负载的多种糖苷功能化药剂释放在同一个细胞内的同一部位。这些纳米材料无法根据不同药物的作用机制将不同药物精确控制递送到其相应的细胞内作用位点。因此，如何利用纳米材料将多种糖苷编辑药物在亚细胞水平中精准控制释放于其作用位点，是实现表面糖苷多通路高效协同编辑来激活NK细胞免疫反应的关键。

发明内容

有鉴于此，本申请提供了重塑肿瘤表面糖苷的膜融合脂质体及其制备方法和抗肿瘤药物，可多通路协同编辑肿瘤细胞表面糖信号，可直接激活NK细胞识别与杀伤作用还能解除肿瘤对NK细胞的免疫活性的抑制作用。

本申请提供的重塑肿瘤表面糖苷的膜融合脂质体(Membrane-fusogenicliposome,MFL)可与细胞膜进行融合，来实现肿瘤细胞表面糖苷多通路协同编辑。所述MFL与肿瘤细胞融合后，可根据不同种类药物的机理将其分别递送至肿瘤细胞质中和细胞膜上。通过控制药物在一个细胞内的空间差异性分布，所述MFL可以优化不同途径的表面糖苷编辑效率来高效激活NK细胞以杀伤肿瘤。

本申请提供的重塑肿瘤表面糖苷的膜融合脂质体为核壳结构的MFL。该MFL表面修饰有NK激活型的糖苷、内核负载有抑制肿瘤表面NK激活型糖苷的试剂。通过与肿瘤细胞的膜融合作用，MFL可以：(1)将免疫激活性的糖苷锚定在肿瘤表面以直接激活NK细胞对肿瘤的细胞毒性作用；(2)同时释放抑制肿瘤表面NK激活型糖苷的试剂至肿瘤细胞内部，通过下调肿瘤表面免疫抑制型糖苷的表达来解除对NK细胞活性的抑制。通过这种精确控制两种药物在一个细胞内的空间分布，同时优化两种途径的糖苷编辑效果，从而将肿瘤表面糖信号由NK细胞抑制型(唾液酸)直接逆转为NK细胞激活型(路易斯X三糖，甘露糖等)，来多途径高效协同唤醒NK细胞免疫活性以高效清除肿瘤。

本申请第一方面提供了重塑肿瘤表面糖苷的膜融合脂质体，由内核和外壳组成，包括：

所述内核包括可负载疏水药物的纳米材料，和负载在所述纳米材料的肿瘤表面NK抑制型糖苷清除剂；

所述外壳由磷脂结构脂质、阳离子功能脂质和NK激活型糖苷修饰的聚乙二醇功能化脂质组成。

另一实施例中，所述内核的纳米材料选自聚(乙交酯-co-丙交酯)(PLGA)、白蛋白、聚己内酯、聚草酸酯、聚β-氨脂、壳聚糖、纳米碳酸钙和介孔硅纳米材料中的一种或多种。