[发明专利]一种含有高活性副干酪乳杆菌口腔贴膜的制备方法

权利要求书

1.一种含有高活性副干酪乳杆菌口腔贴膜的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)菌液制备：对副干酪乳杆菌进行活化，无菌去离子水稀释，备用；

(2)纺丝液制备：将食品级环糊精溶于无菌去离于水中，得到环糊精纺丝液，再向环糊精纺丝液中加入益生元和辅料，得到环糊精/益生元/辅料纺丝液；再向环糊精/益生元/辅料纺丝液中加入副干酪乳杆菌混悬液，搅拌均匀，得到环糊精/益生元/副干酪乳杆菌/辅料混合液；将上述纺丝液115℃，15～20min灭菌，晾凉备用；

(3)将步骤(2)中所得纺丝液通过静电纺丝制备得到负载副干酪乳杆菌和益生元的纳米纤维膜。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所使用的副干酪乳杆菌为副干酪乳杆菌(Lacticaseibacillus paracase)LC88(CGMCC 1.9088)。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述副干酪乳杆菌菌液制备具体为：挑取-80℃保存的菌种，使用MRS固体培养基30～37℃、20～24h对菌种进行复苏；挑取复苏后的单菌落接到15ml MRS肉汤液体培养基，100～200rpm、37℃、培养20～24h；吸取1.5ml菌液接种到150ml MRS肉汤液体培养基，100～200rpm、30～37℃、培养20～24h；所得菌液10～15g，常温离心5～10min弃去上清，所得菌体用无菌去离子水洗涤、得到浓度为108CFU/ml菌液备用。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述环糊精/益生元/辅料纺丝液中的环糊精的质量浓度为15％～20％；所制备的纺丝液中，阿拉伯糖和环糊精的浓度比为1:7.5～1:10，所述辅料为具有清新口气作用的薄荷脑、香精等，辅料添加量为纺丝液的0.01wt％～0.02wt％。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述环糊精纺丝液中的环糊精的质量浓度为15％；所制备的纺丝液中，阿拉伯糖和环糊精的浓度比为1:7.5。

6.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述的副干酪乳杆菌菌液的加入量与步骤(2)中的环糊精/益生元/辅料纺丝液的体积比为1:4～5。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述的益生元为L-阿拉伯糖。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述的静电纺丝的步骤包括：

(1)将纺丝液通过1ml注射器注入静电纺丝仪，安装平头针，头针头直径0.4～0.6mm；

(2)静电纺丝接收端为5cm*5cm铝箔纸，贴于培养皿中央并接地线，在接收装置上形成纳米纤维口腔贴片；

(3)所述静电纺丝条件为：给液速度为0.5～1.0mL/h，电压为15～20KV，接收距离10～15cm，温度为20～25℃，湿度35％，纺丝时间90min。

9.权利要求1或2所述的方法在制备高活性益生菌口腔贴膜中的应用。

10.权利要求1或2所述的方法在制备缓解牙周炎口腔贴膜中的应用。