[发明专利]一种产糠胺的基因工程菌及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种产糠胺的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌过表达转氨酶基因OATA和丙氨酸脱氢酶基因ALD。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌被敲除DNA结合转录双调节因子arcA，并过表达转氨酶基因OATA、丙氨酸脱氢酶基因ALD和T7启动子连接碳存储调节因子CsrB基因。

3.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述转氨酶基因OATA，来源于人苍白杆菌，基因序列如SEQ ID NO.3所示；所述丙氨酸脱氢酶基因ALD，来源于来源于谷草芽孢杆菌，Genebank ID：936557；csrB基因序列如SEQ ID NO.1所示；DNA结合转录双调节因子arcA的基因序列如SEQ ID NO.4所示；T7启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求1-3任一项所述的基因工程菌的出发菌株为大肠杆菌E.coliBL21(DE3)。

5.含有权利要求1-3任一项所述的基因工程菌的微生物制剂。

6.权利要求1-3任一项所述的基因工程菌的制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体步骤如下：

步骤1：敲除大肠杆菌E.coli BL21(DE3)基因组上的全局调控因子arcA，获得突变菌株I；将T7启动子的序列插入到出发菌株的碳存储调节因子CsrB基因序列前，获得突变菌株II，并制备感受态细胞；

步骤2：制备含有转氨酶基因OATA、丙氨酸脱氢酶基因ALD的重组质粒，并将重组质粒导入感受态细胞中，获得重组大肠杆菌。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤1具体步骤为以T7启动子的核苷酸序列为搭桥序列，克隆获得T7-csrB同源臂；将T7-csrB同源臂连接至自杀质粒pRE112，获得重组质粒pRE112-T7-csrB；利用重组质粒pRE112-T7-csrB介导的同源重组法在突变菌株I的碳存储调节因子csrB基因序列前插入T7启动子的核苷酸序列，获得突变菌株II，命名为E.coli BL21(DE3)△arcA T7-csrB。

8.一种全细胞催化制备糠胺的方法，其特征在于，利用权利要求1-3任一项所述的基因工程菌在含有糠醛的发酵培养体系中发酵，发酵的温度为37℃，至少12小时。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，发酵培养体系的成分包括氨基供体、葡萄糖和呋喃-2-甲醛。

10.权利要求1-3任一项所述的基因工程菌在合成糠胺和提高糠胺产量中的应用。