[发明专利]一种基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法

权利要求书

1.一种基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，包括步骤：

提供S6引物和S7引物，通过所述S6引物和S7引物退火形成夹板接头；

将待测的小RNA进行逆转录，获得一链cDNA；

将所述一链cDNA进行变性；

将变性后的一链cDNA与所述夹板接头混合于连接体系中进行反应，得到连接产物；

利用USER酶对所述连接产物进行消化，得到特定接头序列cDNA；

将所述特定接头序列cDNA与S4引物以及S19引物混合于扩增体系中进行反应，得到所述的小RNA高通量测序文库。

2.根据权利要求1所述的基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，所述夹板接头具有双链DNA结构且末端突出6个兼并碱基。

3.根据权利要求1所述的基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，所述S6引物的序列为：

CACCTCTCTAUACACUCTTUCCCUACACGACGCTCTUCCGATCUNNN NNN-invT；

所述S7引物的序列为：

Phos-AGATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGTATAGAGAGGT G-invT。

4.根据权利要求1所述的基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，利用基于polyA加尾的小RNA逆转录体系对待测的小RNA进行逆转录。

5.根据权利要求1所述的基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，利用基于DNA-DNA连接的方式对待测的小RNA的逆转录一链cDNA连接接头，之后利用特异引物进行扩增得到测序文库。

6.根据权利要求1所述的基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，所述连接体系包括DNA连接酶以及DNA连接酶缓冲液。

7.根据权利要求1所述的基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，所述扩增体系包括DNA聚合酶、dNTP以及缓冲液。

8.根据权利要求1所述的基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，所述S4引物的序列如SEQ.ID.NO 1所示；所述S19引物的序列如SEQ.ID.NO 2所示。

9.一种基于夹板连接的小RNA高通量测序文库的构建方法的应用，其特征在于，将如权利要求1-8任一所述的构建方法应用于小RNA测序文库的构建或者qRT-PCR的检测。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述小RNA包括microRNA、piRNA、siRNA、tRNA以及rRNA。