[发明专利]一种蚓激酶高效提取全资源化方法在审
| 申请号： | 202211653322.7 | 申请日： | 2022-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN115772511A | 公开（公告）日： | 2023-03-10 |
| 发明（设计）人： | 武钰岐;暴仕龙;李维尊 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12N9/68 | 分类号： | C12N9/68 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 王儒 |
| 地址： | 300071*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 激酶 高效 提取 资源 方法 | ||
1.一种蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，包括以下步骤：
将蚯蚓浸泡于第一缓冲溶液后，进行匀浆，将所得匀浆物料进行膜过滤，得到蛋白溶液；
将所述蛋白溶液与乙醇混合，进行盐析，得到上清液和盐析物；
将所述盐析物与第二缓冲溶液混合，将所得混合液进行蛋白纯化后，冷冻干燥，得到蚓激酶；
将所述上清液进行减压蒸馏后，将所得残液与匀浆所得蚯蚓残渣混合后，进行发酵，得到生态肥料；
所述第一缓冲溶液和第二缓冲溶液均为碳酸氢钾-醋酸铵混合溶液；
所述第一缓冲溶液和第二缓冲溶液的pH值独立为7.5～8.0。
2.根据权利要求1所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述第一缓冲溶液和第二缓冲溶液的pH值为7.8。
3.根据权利要求1所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述浸泡的时间为30～60min。
4.根据权利要求1所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述匀浆的转速为20000～25000rpm，时间为3～5min。
5.根据权利要求1所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述膜过滤所用膜的截留分子量为50KD，所述蛋白溶液中蛋白分子量≤50KD。
6.根据权利要求1或5所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述乙醇与蛋白溶液的体积比为(0.5～3):1。
7.根据权利要求1所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述第二缓冲溶液与盐析物的质量比为(10～100):1。
8.根据权利要求1所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述减压蒸馏的温度为50～60℃。
9.根据权利要求1所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述发酵的温度为30～35℃，时间为10～15天。
10.根据权利要求9所述的蚓激酶高效提取全资源化方法，其特征在于，所述发酵在无氧密闭条件下进行。
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