[发明专利]一种蚓激酶高效提取全资源化方法

说明书

本发明提供了一种蚓激酶高效提取全资源化方法，属于生物提取技术领域。本发明采用碳酸氢钾‑醋酸铵结合乙醇盐析方法提取蚓激酶蛋白，碳酸氢钾与醋酸铵缓冲溶液提供的pH＝7.5～8.0的条件能够维持蚓激酶蛋白的高活性，提高提取率；乙醇能降低溶液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低，乙醇与水的作用能破坏蛋白质的水化膜，蛋白质在乙醇中由于溶解度存在差异而分离析出，实现蚓激酶的高效提取分离；此外，本发明将蚓激酶提取后所得废液转化为液体肥，综合利用残余物质，解决了废液资源化利用难题，实现蚯蚓提取过程的绿色环保和全资源化回收利用。

技术领域

本发明涉及生物提取技术领域，尤其涉及一种蚓激酶高效提取全资源化方法。

背景技术

蚯蚓是土壤动物最大的常见类群之一，在生态系统中扮演着多种角色，既是“消费”者、也是“创造”者。它通过取食、消化、排泄(蚯蚓粪)、分泌(粘液)和掘穴等活动对土壤过程的物质循环和能量传递作贡献，可以对多个决定土壤肥力的过程产生重要影响。蚯蚓作为高蛋白饲料，蚯蚓粪是有机肥原料，具有良好经济价值。蚯蚓也是中药材，具有巨大的药用价值，蚯蚓体内的蚓激酶具有抗血栓作用，能够跟踪溶栓，有效溶解微栓，改善微循环，加强心、脑血管侧支循环，开放性修复血管受损内皮细胞，增加血管弹性，改善血管供氧功能，降低血液粘度，降低血小板聚集率，抑制血栓再次形成。修复血栓发生后周边坏死脑细胞，挽救半暗区。

目前，现有的蚓激酶提取方法包括：NH₄Ac-HAc缓冲液、磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液匀浆，硫酸铵盐析，离子交换色谱或透析的方式获得粗酶液。然而，该技术采用的缓冲液、盐析溶液无法回收或再利用，为环境带来风险的同时也提高了蚓激酶提取成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蚓激酶高效提取全资源化方法，能够实现蚓激酶的高效提取分离和全资源化回收利用，且成本低。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种蚓激酶高效提取全资源化方法，包括以下步骤：

将蚯蚓浸泡于第一缓冲溶液后，进行匀浆，将所得匀浆物料进行膜过滤，得到蛋白溶液；

将所述蛋白溶液与乙醇混合，进行盐析，得到上清液和盐析物；

将所述盐析物与第二缓冲溶液混合，将所得混合液进行蛋白纯化后，冷冻干燥，得到蚓激酶；

将所述上清液进行减压蒸馏后，将所得残液与匀浆所得蚯蚓残渣混合后，进行发酵，得到生态肥料；

所述第一缓冲溶液和第二缓冲溶液均为碳酸氢钾-醋酸铵混合溶液；

所述第一缓冲溶液和第二缓冲溶液的pH值独立为7.5～8.0。

优选的，所述第一缓冲溶液和第二缓冲溶液的pH值独立为7.8。

优选的，所述浸泡的时间为30～60min。

优选的，所述匀浆的转速为20000～25000rpm，时间为3～5min。

优选的，所述膜过滤所用膜的截留分子量为50KD，所述蛋白溶液中蛋白分子量≤50KD。

优选的，所述乙醇与蛋白溶液的体积比为(0.5～3):1。

优选的，所述第二缓冲溶液与盐析物的质量比为(10～100):1。

优选的，所述减压蒸馏的温度为50～60℃。

优选的，所述发酵的温度为30～35℃，时间为10～15天。

优选的，所述发酵在无氧密闭条件下进行。