[发明专利]一种用于眼部疾病治疗的冻干粉制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于眼部疾病治疗的冻干粉制剂及其制备方法，属于干细胞技术领域；所述冻干粉制剂的制备方法包括以下步骤：先获取人脐带间充质干细胞，再用含雷帕霉素的培养基对人脐带间充质干细胞进行培养，培养后收集上清液并将上清液过滤、最后将滤液浓缩、冻干制成冻干粉制剂；本发明所述冻干粉制剂将细胞因子液制成冻干粉后方便保存，能够保护细胞因子的活性和功能，充分发挥作用；将冻干粉进行复溶，溶解较快，溶解完全；除具有免疫抑制作用外，还可以改善局部微循环，血液循环会促进营养物质的转运促进组织修复和细胞再生，加速修复角膜上皮细胞缺损，增加腺体分泌。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，特别涉及一种用于眼部疾病治疗的冻干粉制剂及其制备方法。

技术背景

干眼症(dyreyesyndrome，xeorphhtalmia)又名角结膜干燥症，多发于40～50岁女性，是一种眼部和/或全身多种因素(如眼表功能障碍、眼部外伤、糖尿病、炎症等)引起的泪腺低分泌而导致泪膜异常、眼表上皮干变的常见眼科疾病。干眼症患者的临床初始表现包括异物感、干涩感、发痒、烧灼感、畏光、视物模糊、易视疲劳、难以名状的不适及不能耐受有烟尘的环境等。这些症状随病情进展而加重，最终出现角膜溃疡甚至失明。

由于内在因素(泪膜破坏、性激素失调等)和外在因素(环境、手术和药物等)多重因素影响，干眼病患者急剧增多且呈年轻化发展趋势干眼病目前已成为最常见的眼部疾病之一，干眼症的主要机制有泪液高渗环境和炎症反应、性激素失调、神经调节异常、黏蛋白异常、血液循环。而治疗方式主要分为现代医学治疗和中医治疗。随着对干眼病病理研究的逐步阐明炎症在干眼病中发挥着重要的作用，在现代医学治疗中抗炎症治疗已经成为了治疗干眼症的主要手段。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明提供了一种用于眼部疾病治疗的冻干粉制剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提出如下方案：

本发明提供了一种用于治疗眼部疾病的冻干粉制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将人脐带间充质干细胞先用含10％胎牛血清的DMEM培养基进行第一培养后，弃去上清液，得到第一培养产物；

2)将所述步骤1)中第一培养产物用含雷帕霉素的DMEM培养基进行第二培养后，弃去上清液，得到第二培养产物；

3)将所述步骤2)中的第二培养产物加入含10％胎牛血清的DMEM培养基进行第三培养后，弃去上清液，得到第三培养产物；

4)将所述步骤3)中的第三培养产物用DMEM培养基进行第四培养后，收集上清液；

5)将所述步骤4)中的上清液过滤，将所得滤液依次浓缩、冻干，得到用于治疗眼部疾病的冻干粉制剂。

优选的，所述步骤1)中人脐带间充质干细胞细胞个数为7.5×10⁵/ml。

优选的，所述步骤2)中雷帕霉素浓度为900nM。

优选的，所述步骤2)中第二培养的时间为4h。

优选的，所述步骤3)中第三培养时间为12h。

优选的，所述步骤4)中第四培养时间为24h。

优选的，所述步骤5)的过滤方式为用0.22μm的无菌过滤器过滤。

优选的，所述步骤5)的浓缩方式为使用截留孔径为5kd的超滤膜堆以切向流方式进行浓缩。

优选的，所述步骤5)的冻干方式为将滤液浓缩后分装到西林瓶中置冷冻干燥机内进行冷冻干燥。

本发明还提供了一种所述制备方法制备得到的用于治疗眼部疾病的冻干粉制剂。

本发明公开了以下技术效果：