[发明专利]血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法

权利要求书

1.血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、将待测血浆和内标物WXFL混匀，离心后，取上清液与水混匀，得待测样品；所述待测血浆由以下方法制备得到：将血浆与稳定剂1混匀即得；所述稳定剂1为饱和醋酸铵生理盐水溶液-冰醋酸、饱和醋酸铵生理盐水溶液-甲酸、浓氨水-甲酸中的至少一种；所述饱和醋酸铵生理盐水溶液-冰醋酸由以下方法制备得到：将饱和醋酸铵生理盐水溶液和冰醋酸按体积比10：3～5混匀即得；所述饱和醋酸铵生理盐水溶液-甲酸由以下方法制备得到：将饱和醋酸铵生理盐水溶液和甲酸按体积比10：3～5混匀即得；所述浓氨水-甲酸由以下方法制备得到：将浓氨水和甲酸按体积比10：3～5混匀即得；

B、待测样品经高效液相色谱-串联质谱仪检测样品中JDB0131和/或代谢物WXWD的色谱峰，并据此计算所述待测血浆中JDB0131和/或代谢物WXWD浓度；

步骤A中，制备待测血浆所用血浆由以下方法制备得到：将全血与稳定剂2混合，然后离心即得；所述稳定剂2由以下方法制备得到：将稳定剂1和生理盐水按体积比1：2混合即得；制备待测血浆所用血浆时，所述稳定剂2的用量为20～40μL/mL全血；

步骤A中，制备待测血浆时，所述稳定剂1与血浆的体积比为40～50uL：1mL；

步骤B中，高效液相色谱条件为：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18，50×2.1mm，1.7μm；流动相：A水相：甲酸：氨水：水体积比＝0.5：0.5：1000，B有机相：乙腈；

步骤B中，质谱条件为：检测方式：多反应离子监测MRM，正离子模式扫描；离子源：ESI源；

所述JDB0131为所述WXWD为所述WXFL为

2.根据权利要求1所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤A中，所述内标物WXFL以内标工作液形式加入，所述内标工作液为：以乙腈为溶剂配置WXFL浓度为2～100ng/mL的内标工作液；所述内标工作液的加入量为不少于待测血浆体积的3倍。

3.根据权利要求2所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤A中，所述内标工作液的加入量为待测血浆体积的3～20倍。

4.根据权利要求1所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤A中，所述上清液与水的体积比为30：70～20：80。

5.根据权利要求1所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤A中，待测血浆和内标物WXFL混匀后，控制离心转速不小于10000rpm，离心时间不少于5min，离心温度2～8℃。

6.根据权利要求1所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤B中，高效液相色谱条件为：

柱温：40℃；进样量不超过20μL；

梯度洗脱程序为：

。

7.根据权利要求1所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤B中，质谱条件为：检测参数为：

8.根据权利要求1～7任一项所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤B中，采用内标法，以JDB与内标物WXFL的响应比和/或代谢物WXWD与内标物WXFL的响应比带入各自标准曲线方程，计算所述待测血浆中的JDB0131和/或代谢物WXWD浓度。