[发明专利]血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法

说明书

本发明公开了血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，属于生物医药分析检测技术领域。本发明方法将待测血浆和内标物WXFL混匀，离心后，取上清液与水混匀，得待测样品；待测样品经高效液相色谱‑串联质谱仪检测样品中JDB0131和/或代谢物WXWD的色谱峰，并据此计算所述待测血浆中JDB0131和/或代谢物WXWD浓度。本发明基于HPLC‑MS/MS技术，以WXFL为内标，在全血和血浆中加入适宜稳定剂，能够高通量、快速灵敏的单独或同时检测JDB0131及其代谢物，结果准确可靠。

技术领域

本发明属于生物医药分析检测技术领域，具体涉及血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法。

背景技术

JDB0131是硝基咪唑类的新型抗结核化合物。据已有的体外活性，药代动力学和体内药效的结果来看，JDB0131具有优异的体内药效、肺部组织分布以及良好的安全性。

但目前并没有针对该小分子及其体内代谢物在生物样品中的血药浓度检测分析的相关报道。同时，由于该化合物及其代谢物在血浆及全血中不稳定，导致常规检测手段结果不准确。因此急需开发一种专用于JDB0131及其代谢物，并且具有高通量、快速灵敏、结果准确的检测方法。

发明内容

为了弥补现有技术的空白，本发明提供了一种血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其包括以下步骤：

A、将待测血浆和内标物WXFL混匀，离心后，取上清液与水混匀(一般震荡时间大于3s，液体混匀即可)，得待测样品；所述待测血浆由以下方法制备得到：将血浆与稳定剂1混匀即得；所述稳定剂1为饱和醋酸铵生理盐水溶液-冰醋酸、饱和醋酸铵生理盐水溶液-甲酸、浓氨水-甲酸中的至少一种；所述饱和醋酸铵生理盐水溶液-冰醋酸由以下方法制备得到：将饱和醋酸铵生理盐水溶液和冰醋酸按体积比10：3～5混匀即得；所述饱和醋酸铵生理盐水溶液-甲酸由以下方法制备得到：将饱和醋酸铵生理盐水溶液和甲酸按体积比10：3～5混匀即得；所述浓氨水-甲酸由以下方法制备得到：将浓氨水和甲酸按体积比10：3～5混匀即得；

B、待测样品经高效液相色谱-串联质谱仪检测样品中JDB0131和/或代谢物WXWD的色谱峰，并据此计算所述待测血浆中JDB0131和/或代谢物WXWD浓度。

优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述稳定剂1为饱和醋酸铵生理盐水溶液-冰醋酸。

优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述稳定剂1为10：3(v：v)的饱和醋酸铵生理盐水溶液-冰醋酸、10：3(v：v)的饱和醋酸铵生理盐水溶液-甲酸、2：1(v：v)的浓氨水-甲酸中的至少一种。

最优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述稳定剂1为10：3(v：v)的饱和醋酸铵生理盐水溶液-冰醋酸。

其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，制备待测血浆所用血浆由以下方法制备得到：将全血与稳定剂2混合，然后离心即得；所述稳定剂2由以下方法制备得到：将稳定剂1和生理盐水按体积比1：2混合即得。

优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，制备待测血浆所用血浆时，所述稳定剂2的用量为20～40μL/mL全血。

其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，制备待测血浆时，所述稳定剂1与血浆的体积比为40～50uL：1mL。

在探索化合物在有机溶剂中的溶解性时，本发明选择了乙腈，内标工作液溶剂则需与其保持一致。按照本领域常识，内标工作液中内标峰与中浓度待测样品峰响应接近即可，并且同一分析方法中要恒定。因此，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述内标物WXFL以内标工作液形式加入，所述内标工作液为：以乙腈为溶剂配置WXFL浓度为2～100ng/mL的内标工作液。