[发明专利]用于支原体通用检测引物组合、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于支原体通用检测引物组合，其特征在于，所述引物组合为靶标上游引物和下游引物，所述靶标上游引物的核苷酸序列是SEQ ID No.1：GAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGAT，所述靶标下游引物的核苷酸序列是SEQ ID No.2：CTATATCTCTATAGCTTTGC。

2.一种用于检测支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括根据权利要求1所述的引物组合，和内参上游引物的核苷酸序列SEQ ID No.3:TTTGGATAATATTCTTTTTC和内参下游引物的核苷酸序列SEQ ID No.4:ATGAACTAATTGTCTAGCTC。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性质控品和空白对照品。

4.一种用于检测支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括根据权利要求1所述的引物组合，和靶标探针核苷酸序列SEQ ID No.5:TCCGCCTGAGTAGTA。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内参上游引物的核苷酸序列SEQ ID No.3:TTTGGATAATATTCTTTTTC、内参下游引物的核苷酸序列SEQ ID No.4:ATGAACTAATTGTCTAGCTC和内参探针核苷酸序列SEQ ID No.6：GTATGGCTCCCACCATTCCCGGAG。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性质控品和空白对照品。

7.根据权利要求1-6任一所述的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒用于检测肺炎支原体、衣阿华支原体、精氨酸支原体、口腔支原体、莱氏甾原体、惰性支原体、人型支原体、生殖支原体、唾液支原体、灵长类支原体、解脲支原体、无胆甾原体、发酵支原体、腐败支原体、华液支原体、结膜支原体、移动支原体、关节炎支原体、无胆甾原体、碱性支原体、艾尔维支原体、门支原体、模仿支原体、产脂支原体、溶神经支原体、产碱枝原体、泡沫支原体、厌食霉形体、梨支原体、嗜肝塘支原体、磨石样支原体、螺旋支原体、运动型支原体、耳支原体、口颊支原体、锎支原体、丝状支原体、絮状支原体、粒状支原体、蕈状支原体、印度支原体、加拿大支原体、无乳支原体、牛支原体、牛维支原体、牛眼支原体、牛生殖道支原体、牛鼻支原体、马鼻支原体、猪鼻支原体、猪肺炎支原体、猪华液支原体、绵羊支原体、绵羊肺炎支原体、山羊支原体、犬支原体、磨牙支原体、犬科支原体、猫支原体、猫支支原体、禽支原体、雏支原体、鸽口支原体、鸡毒支原体、鸡滑液支原体、小鸡支原体、火鸡支原体、鸭支原体、鹅支原体、大象支原体、狮子支原体、浣熊支原体、豚鼠支原体、鼠兔支原体、仓鼠支原体、鸵鸟支原体、秃鹰支原体、犀鸟支原体、企鹅支原体、海豚支原体、海狮支原体、海獭支原体、海豹支原体、龟鳖支原体、板囊蛙支原体、蜥蜴支原体、鳄科支原体、ARNO支原体、Zaradi2支原体、Mpeng支原体、黄斑支原体、乳白色支原体、痰支原体、滑膜支原体、科里斯支原体。

8.根据权利要求3所述的试剂盒的应用，其特征在于，根据待检测样本的实验Tm值及出现的熔解曲线峰的个数，进行支原体靶标的判读：1)试剂盒中的空白对照品符合以下质量控制：FAM通道在60℃～90℃区间内无熔解峰；2)试剂盒中的阳性质控品符合以下质量控制：FAM通道在60℃～90℃区间内出现两个熔解峰，且熔点Tm值符合68.5≤Tm1≤71.5且83≤Tm2≤85；3)待检测样本：

a.若FAM通道出现83≤Tm≤85的熔解峰时，判定为支原体阳性；

b.若FAM通道未出现位于支原体靶标83≤Tm≤85的熔解峰，且出现位于内参熔解峰68.5≤Tm≤71.5时，判定为支原体阴性；

c.若FAM通道未出现位于支原体靶标83≤Tm≤85的熔解峰，且未出现位于内参熔解峰68.5≤Tm≤71.5的熔解峰时，此时检测无效。

9.根据权利要求6所述的试剂盒的应用，其特征在于，根据待检测样本的实验Ct值进行支原体靶标的判读：1).靶标通道与内参通道均无Ct值或者Ct值≥38；2)试剂盒中的阳性质控品：靶标通道与内参通道检测均呈S型曲线且Ct值≤32；3)待检测样本：

a.若待测样本靶标通道扩增曲线呈S型曲线，且Ct值＜38，则为支原体检测阳性；

b.若待测样本靶标通道检测扩增曲线不呈S型曲线，或Ct值为0或无Ct值，且内参通道检测Ct值≤32，为支原体检测阴性；

c.如若待测样本靶标通道检测扩增曲线呈S型曲线，且检测样本Ct值为≥38时，需重新检测；若重新检测仍有S型扩增曲线，则报告为支原体检测阳性；若重新检测的扩增曲线不呈S型曲线或无Ct值，内参检测Ct≤32时，报告为支原体检测阴性；

d.若待测样本靶标通道检测扩增曲线不呈S型曲线，样本Ct值为0或者无Ct值，且内参检测Ct32或无数值时，需重新检测。