[发明专利]用于支原体通用检测引物组合、试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种用于支原体通用检测引物组合、试剂盒及其应用，所述引物组合为靶标上游引物SEQ ID No.1和下游引物SEQ ID No.2。本发明的引物组合能够对多达95种支原体进行检测，对支原体检测具有良好特异性和灵敏性。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及用于支原体通用检测引物组合、试剂盒及其应用。

背景技术

支原体(是一类缺乏细胞壁的最小原核细胞型微生物，它结构简单，大小介于病毒和细菌之间。支原体的细胞膜中含甾醇，因此可保持细胞膜的完整性。革兰氏染色不易着色，支原体的种种特性都足以说明它不易被检测和清除的特点。

支原体污染这个世界性问题持续了半个多世纪，给畜牧业、疫苗生产企业、实验操作或工艺生产均带来巨大的经济损失。因此及时检测是否被支原体污染是十分必要的。

支原体的检测方法主要有：分离培养法、荧光染色法、核酸杂交技术、间接突光试验等多种方法。分离培养法对培养基的营养要求高且生长缓慢，不同种支原体所需的培养基也不同，费时费力。荧光染色法易出现假阳性及假阴性。支原体检测利用影像学检查的方法其特异性较差。核酸杂交技术中的核酸探针用放射性核素或其他方法标记，其探针的敏感性较差，不便于一般实验室常规检测。间接突光试验的特异性不强，存在支原体种属间交叉免疫反应。所以寻找一种特异性好，灵敏度高，快速高效的支原体检测方式十分必要。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种用于支原体通用检测引物组合，所述引物组合为靶标上游引物和下游引物，所述靶标上游引物的核苷酸序列是SEQ ID No.1：GAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGAT，所述靶标下游引物的核苷酸序列是SEQ ID No.2：CTATATCTCTATAGCTTTGC。

在一种实施方式中，所述试剂盒包括上述的引物组合，和内参上游引物的核苷酸序列SEQ ID No.3:TTTGGATAATATTCTTTTTC和内参下游引物的核苷酸序列SEQ IDNo.4:ATGAACTAATTGTCTAGCTC。

在一种实施方式中，所述试剂盒还包括阳性质控品和空白对照品。

在一种实施方式中，本发明提供一种用于检测支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括上述的引物组合，和靶标探针核苷酸序列SEQ ID No.5:TCCGCCTGAGTAGTA。

在一种实施方式中，所述试剂盒还包括内参上游引物的核苷酸序列SEQ ID No.3:TTTGGATAATATTCTTTTTC、内参下游引物的核苷酸序列SEQ ID No.4:ATGAACTAATTGTCTAGCTC和内参探针核苷酸序列SEQ ID No.6：GTATGGCTCCCACCATTCCCGGAG。

在一种实施方式中，所述试剂盒还包括阳性质控品和空白对照品。