[发明专利]一种具有强扩增能力的间充质干细胞的筛选方法

权利要求书

1.一种具有强扩增能力的间充质干细胞的筛选方法，所述筛选方法包括依次进行的初步筛选和极限传代筛选，其中：

所述初步筛选包括以下步骤：

(1)获得多个P0间充质干细胞样品；

(2)将步骤(1)中的P0间充质干细胞扩增至P4间充质干细胞；

(3)筛选从P0至P4的细胞群倍加数(PDL)≥25的P4间充质干细胞：

所述极限传代筛选包括以下步骤：

(1)将初步筛选合格的P4间充质干细胞扩增至P10间充质干细胞；

(2)筛选同时满足以下标准的P10间充质干细胞：

a.从P0至P10的PDL≥45；

b.从P4至P10的任意代次倍增时间≤60h；

c.每100个细胞成克隆数≥10个。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述间充质干细胞样品为人骨髓、脐带、胎盘、脂肪或牙髓组织来源的间充质干细胞。

3.根据权利要求1或2所述的筛选方法，其特征在于，所述间充质干细胞样品为不同供者来源。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述间充质干细胞为人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在所述初步筛选后，检测筛选出的P4间充质干细胞，确定细胞同时满足以下标准：

a.阳性表面标志物CD166、CD105、CD90、CD73的表达≥95％，阴性表面标志物HLA-DR、CD34、CD45、CD19、CD14的表达≤2％；

b.具有成脂、成骨、成软骨分化的三系分化能力；

c.POSTN、ISLR、SDF-1表达阳性。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在所述极限传代筛选后，检测筛选出的P10间充质干细胞，确定细胞同时满足以下标准：

a.细胞平均直径≤19μm；

b.阳性表面标志物CD166、CD105、CD90、CD73表达≥95％，阴性表面标志物HLA-DR、CD34、CD45、CD19、CD14表达≤2％；

c.具有三系分化能力；

d.POSTN，ISLR，SDF-1表达阳性。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述初步筛选和极限传代筛选的细胞扩增步骤分别包括：

细胞接种后，在37℃，1％-7％O2和1％-10％CO2下培养细胞；然后用PBS洗涤细胞，胰酶消化后收获细胞；接种后再次在37℃，1％-7％O2和1％-10％CO2下培养，以进行传代；在传代到所需代次后，用PBS洗涤细胞，胰酶消化后收获细胞，并计数。