[发明专利]水产品中沃尼妙林、泰妙菌素及其代谢物残留量的定量检测方法

说明书

本发明公开了一种同位素稀释高效液相色谱‑串联质谱测定水产品中沃尼妙林、泰妙菌素及其代谢物残留量的方法，步骤是：A.称取水产品肌肉组织，加入乙腈含1%乙酸、无水硫酸镁和氯化钠提取净化；B.加入氢氧化钠溶液水解；C.加入乙酸乙酯含1%乙酸进行反萃取；D.采用同位素稀释高效液相色谱‑串联质谱分时间段切换离子模式检测水产品中沃尼妙林、泰妙菌素及其代谢产物8‑α‑羟基妙林的残留量；E.基质标准曲线法定量：沃尼妙林、泰妙菌素采用内标法定量，沃尼妙林‑D₆和泰妙菌素‑¹³C₄分别作为沃尼妙林、泰妙菌素的内标；8‑α‑羟基妙林采用外标法定量。该方法操作简便，基质效应低、检测限低、准确度和精密度高。

技术领域

本发明属于水产品安全检测技术领域，具体涉及一种同位素稀释高效液相色谱-串联质谱测定水产品中沃尼妙林、泰妙菌素及其代谢物残留量的方法。

背景技术

截短侧耳素(Pleuromutilin)是高等真菌担子菌纲侧耳属Pleurots mutilus和Pleurots passeckerianus菌种经深层培养产生的一种抗生素，属双萜类化合物。沃尼妙林(Valnemulin)(图1)和泰妙菌素(Tiamulin)(图2)是截短侧耳素的衍生物。

沃尼妙林和泰妙菌素均是动物专用抗生素，对肠道螺旋体、支原体及革兰氏阳性菌有强抗菌活性而被广泛使用。体内外试验表明，泰妙菌素也对鱼的革兰氏阴性菌也具有较好的抗菌效果，泰妙菌素对5株鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的抑菌浓度在1.6-6.25μg/mL范围内，泰妙菌素对11株鲑肾杆菌最小抑菌浓度(MIC)为0.62-87.5μg/mL，最小杀菌浓度(MBC)0.62-175μg/mL。由于截短侧耳类抗生素使用后会在鱼体内产生残留，人们长期食用含有该类抗生素残留的水产品会导致人体的结肠炎、菌群失调和耐药性等问题。2010年韩国增加针对水产品的检测项目，新增抗生素类项目15项，其中规定泰妙菌素在鱼类或甲壳类中的最大残留限量(MRL)为0.1mg/kg。欧盟规定了泰妙菌素在猪、兔、鸡、火鸡组织中以可能水解为8-α-羟基妙林代谢物的总和作为残留标示物的MRL为100μg/kg～1000μg/kg，在鸡蛋中以泰妙菌素为残留标示物的MRL为1000μg/kg；欧盟也规定了沃尼妙林在猪肌肉、肝脏和肾脏中以沃尼妙林为残留标示物的MRL分别为50μg/kg、500μg/kg、100μg/kg。日本农林渔业部对泰妙菌素和沃尼妙林在动物肝脏、脂肪、肌肉组织中分别以泰妙菌素和沃尼妙林为残留标示物制定的MRL为0.04～0.6mg/kg。我国尚未制定泰妙菌素、沃尼妙林在水产品中的MRL，仅规定了泰妙菌素在猪/兔(肌肉、肝脏)、鸡(肌肉、皮+脂、肝)、火鸡(肌肉、皮+脂、肝)组织中以可被水解为8-α-羟基妙林(图3)的代谢物总和为残留标志物，鸡蛋中以泰妙菌素为残留标志物的MRL为0.1～1.0mg/kg。