[发明专利]一种酮基还原酶突变体及其制备方法、应用和艾司利卡西平的制备方法在审
| 申请号： | 202211673214.6 | 申请日： | 2022-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN115948357A | 公开（公告）日： | 2023-04-11 |
| 发明（设计）人： | 祝俊;徐飞;钟锦潮;张晨晨;陈剑;余长泉 | 申请（专利权）人： | 金达威生物技术（江苏）有限公司;厦门金达威集团股份有限公司;南京桦冠生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 刘二艳 |
| 地址： | 226200 江苏省南通市启东市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 还原酶 突变体 及其 制备 方法 应用 艾司利卡 西平 | ||
1.一种酮基还原酶突变体，其特征在于，所述酮基还原酶突变体为发生了氨基酸突变的酮基还原酶，所述酮基还原酶包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述氨基酸突变的类型包括D77S、P195Y、D207F、D77S/P195Y、P195Y/D207F、D77S/D207F或D77S/P195Y/D207F。
2.根据权利要求1所述的酮基还原酶突变体，其特征在于，所述酮基还原酶的编码序列包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；
优选地，所述酮基还原酶来源于Microdochium trichocladiopsis。
3.根据权利要求1或2所述的酮基还原酶突变体，其特征在于，所述氨基酸突变的类型D77S包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D77S的编码序列包括SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型P195Y包括SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型P195Y的编码序列包括SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D207F包括SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D207F的编码序列包括SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D77S/P195Y包括SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D77S/P195Y的编码序列包括SEQ IDNO.10所示的核苷酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型P195Y/D207F包括SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型P195Y/D207F的编码序列包括SEQ IDNO:12所示的核苷酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D77S/D207F包括SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D77S/D207F的编码序列包括SEQ IDNO:14所示的核苷酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D77S/P195Y/D207F包括SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；
优选地，所述氨基酸突变的类型D77S/P195Y/D207F的编码序列包括SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列；
优选地，获得D77S突变类型的正向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:17所示的序列，反向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:18所示的序列；
优选地，获得P195Y突变类型的正向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:19所示的序列，反向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:20所示的序列；
优选地，获得D207F突变类型的正向引的核苷酸物序列包括SEQ ID NO:21所示的序列，反向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:22所示的序列。
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-3中任一项所述的酮基还原酶突变体。
5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有至少一个拷贝的权利要求4所述的核酸分子。
6.一种酮基还原酶突变体转化子，其特征在于，所述酮基还原酶突变体转化子为表达如权利要求1-3中任一项所述的酮基还原酶突变体的基因工程菌株；
优选地，所述酮基还原酶突变体转化子含有权利要求4所述的核酸分子；
优选地，所述酮基还原酶突变体转化子含有权利要求5所述的表达载体；
优选地，所述基因工程菌株包括大肠杆菌。
7.一种如权利要求1-3中任一项所述的酮基还原酶突变体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
构建表达载体，转化至受体细胞中，构建酮基还原酶突变体转化子；
培养所述酮基还原酶突变体转化子，收集培养物，得到所述酮基还原酶突变体。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于金达威生物技术（江苏）有限公司;厦门金达威集团股份有限公司;南京桦冠生物技术有限公司，未经金达威生物技术（江苏）有限公司;厦门金达威集团股份有限公司;南京桦冠生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202211673214.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
