[发明专利]一种具富硒及抑菌功能的发酵性拉茜斯酵母及其应用

权利要求书

1.一种发酵性拉茜斯酵母(Lachancea fermentati)，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.25593。

2.一种权利要求1所述发酵性拉茜斯酵母在制备富硒微生物制剂和/或用于抑菌的制剂或产品中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，所述抑菌中所述的菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌或副溶血弧菌中的至少一种。

4.一种富硒功能和/或抑菌功能的菌株的筛选方法，其包括：

(1)从自然界的土壤中经培养、分离纯化菌株，经菌体形态、扫描电镜判断筛选出酵母菌；

(2)富硒功能和/或抑菌功能的菌株筛选；

(3)对具富硒和/或抑菌功能最强的菌株进行生理生化实验及26S rDNA序列鉴定。

5.根据权利要求4所述的筛选方法，所述步骤(2)中所述富硒功能的菌株筛选方法包括：在无菌条件下，将步骤(1)所述酵母菌接种于含硒的培养基中，培养，培养结束后离心弃上清用水洗涤菌体，冷冻干燥，得到菌粉，菌粉按如下方法测其硒含量，计算转化率，得到转化率最高的酵母菌进行后续发酵优化；

硒含量的测定：(i)消化：称取所述菌粉，加入高氯酸与浓硝酸的混合酸溶液，静置消化，然后加热消化，直至析出白色或类白色晶体物质，停止加热，冷却至室温，加水稀释，得到供试品储备溶液；(ii)空白对照储备溶液：同步骤(i)所述高氯酸与浓硝酸的混合酸溶液；(iii)标准曲线的制备：取硒标准溶液，配制含不同浓度硒的对照品溶液，测定各含不同浓度硒的对照品溶液的吸光度，绘制标准曲线；(iv)测定：分别取供试品储备溶液和空白储备对照，加水稀释，分别得到供试品溶液和空白对照溶液，测定吸光度；根据测得的吸光度，得到所述菌粉的硒含量。

6.根据权利要求5所述的筛选方法，所述含硒的培养基中硒的浓度为5μg/mL-100μg/mL或20μg/mL；和/或

所述含硒的培养基的pH为4.0-8.0或6.0；和/或

所述步骤(2)中所述富硒功能的菌株筛选方法中所述培养的培养温度为18℃-40℃或26℃；和/或

所述高氯酸与浓硝酸的混合酸溶液中高氯酸与浓硝酸体积比为1:2-1:6或1:4；和/或

所述供试品储备溶液中菌粉的浓度为1mg/ml-5mg/ml或2mg/ml；和/或

所述供试品溶液中菌粉的浓度为0.1mg/ml-0.5mg/ml或0.2mg/ml；和/或

所述含不同浓度硒的对照品溶液中硒的含量为0-10μg/ml；和/或

所述吸光度为在波长为400nm-450nm或420nm处的吸光度；和/或

所述含硒的培养基为含硒的YPD培养基；和/或

所述含不同浓度硒的对照品溶液的制备方法包括：分别将不同体积的硒标准溶液与水混合，再加入乙二胺四乙酸二钠水溶液，混合，调节pH约为2.5，再加入3,3'-二氨基联苯胺的盐酸水溶液，混合，静置30min，调节pH约为7.0，用甲苯进行萃取，分液，得到甲苯层，过滤甲苯层，得到甲苯层滤液，所得甲苯层滤液即为含不同浓度硒的对照品溶液；

所述含硒的YPD培养基包括以下组份：10μg/mL-100μg/mL或20μg/mL的硒，以所述含硒的YPD培养基的总质量计算，含0.5wt％-2.0wt％或1.0wt％的酵母膏，1.0wt％-3.0wt％或2.0wt％的蛋白胨，以及1.0wt％-3.0wt％或2.0wt％的葡萄糖，以水为溶剂。

7.根据权利要求4所述的筛选方法，所述步骤(2)中所述抑菌功能中所述的菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌或副溶血弧菌中的至少一种；

所述步骤(2)中所述抑菌功能的菌株筛选的方法包括：将步骤(1)所述酵母菌接种于液体培养基中，种子培养，再于发酵培养基中放大培养，得到发酵制剂，将所述发酵制剂离心，保留上清液，过滤，滤液备用；配制含金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和副溶血弧菌的固体平板，在平板上打孔并添加所述滤液，抑菌性能培养，测量抑菌圈大小。