[发明专利]一种蛋白质组学标准品及其制备系统

权利要求书

1.一种蛋白质组学标准品，其特征在于：所述蛋白质组学标准品为从AC16细胞株中提取获得的细胞全蛋白质或由AC16细胞全蛋白质水解得到的多肽。

2.一种蛋白质组学标准品制备系统，包括细胞存放模块(1)，其特征在于：所述细胞存放模块(1)连接有细胞培养模块(2)，所述细胞培养模块(2)连接有蛋白质分离模块(3)，所述蛋白质分离模块(3)连接有蛋白质水解模块(4)；

所述蛋白质分离模块(3)和蛋白质水解模块(4)连接有成品评估模块(5)，所述成品评估模块(5)连接有成品保存模块(6)。

3.根据权利要求2所述的一种蛋白质组学标准品制备系统，其特征在于：所述细胞存放模块(1)和成品保存模块(6)连接有冷库模块(7)，所述细胞培养模块(2)连接有恒温箱模块(8)和培养器模块(9)。

4.根据权利要求2所述的一种蛋白质组学标准品制备系统，其特征在于：所述蛋白质分离模块(3)包括溶液配制模块(301)和细胞处理模块(304)，所述溶液配制模块(301)连接有细胞缓冲液配制(302)和细胞分解液配制(303)，所述细胞处理模块(304)连接有破碎处理模块(305)和离心处理模块(307)，所述破碎处理模块(305)连接有细胞刮(306)，所述离心处理模块(307)连接有离心机(308)。

5.根据权利要求2所述的一种蛋白质组学标准品制备系统，其特征在于：所述蛋白质水解模块(4)连接有试剂处理模块(10)和成品富集模块(11)，所述成品评估模块(5)连接有质谱鉴定模块(12)和稳定性评估模块(13)。

6.一种蛋白质组学标准品，其特征在于，所述的蛋白质组学标准品由以下方法制备而成：

S1.AC16细胞预处理

取培养瓶装的AC16细胞，去除外包装，用75％酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，静置2-4小时，镜下观察，未超过80％汇合度时，加入5mL培养基混合均匀；

S2.AC16细胞培养

将混合均匀的细胞在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀，然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度，细胞密度达80％-90％，进行传代培养，连续采集9-11个代次细胞，每次分别采集9×10⁶细胞数备用；

S3.总蛋白质获取

冰上操作，配制细胞裂解液和细胞缓冲液，将培养好的细胞进行收集，吸取培养基，预冷细胞缓冲液清洗细胞三次，通过细胞刮(306)将细胞刮脱，收集至离心管，1000rpm离心5分钟，离心后，向细胞沉淀中加入细胞裂解液200μl，混匀后冰上放置40min，10000rpm，4℃，离心15min，上清即为细胞总蛋白质提取物；

S4.总蛋白质水解

向每管200μg的总蛋白质提取物中加入氨基甲脒，加入50mM的DTT，静置30min后加入100mM碘乙酰胺，再次静置30min，去除试剂和交换缓冲液，在适当的pH为7和温度为37℃的环境下，用胰蛋白酶将提取物在碳酸氢铵缓冲液中过夜变性18小时，加入50μL的50mM稀盐酸终止酶切，4℃下12000rpm离心20min收集肽段获得多肽形态的蛋白质组学标准品。

7.根据权利要求6所述的一种蛋白质组学标准品，其特征在于：所述S3中，细胞裂解液组成成分为每1mlNaF溶液加入10μl磷酸酶抑制剂、1μl蛋白酶抑制剂和5μl的100mM的PMSF。

8.根据权利要求6所述的一种蛋白质组学标准品，其特征在于：所述S3中，细胞缓冲液组成成分为每1ml的PBS加入0.2μl的Aprotinin和0.2μl的Leupetin。