[发明专利]一种基于高通量测序技术检测拷贝数变异的文库构建方法

说明书

本发明公开了一种基于高通量测序技术检测拷贝数变异的文库构建方法，涉及文库构建技术领域。该基于高通量测序技术检测拷贝数变异的文库构建方法包括以下步骤：待测样本的处理和模板的提取、使用内切酶对模板进行酶切、酶切完成后按接头Mix配制数据配制接头Mix、片段双选、文库扩增、PCR产物纯化、DNA文库质检以及文库测序。该基于高通量测序技术检测拷贝数变异的文库构建方法，可高效特异捕获全基因组SNP用于CNV分析，提高CNV检测类型和准确性；CNV检测方法与CNV‑Seq相比，可以检测CNV‑seq能够检测的非整倍体、重复、缺失，也能检测CNV‑seq技术无法检测的单倍体、三倍体、多倍体和LOH等。

技术领域

本发明涉及文库构建技术领域，具体为一种基于高通量测序技术检测拷贝数变异的文库构建方法。

背景技术

拷贝数变异(CNV)检测类型包括：非整倍体、重复、缺失、嵌合、杂合性丢失(lossof heterozygosity，LOH)、单亲二体(uniparentaldisomy，UPD)、单倍体、三倍体和多倍体等。染色体非整倍体是指体外受精-胚胎移植周期中发生胚胎染色体非整倍体(aneuploidy)异常，表现为在正常二倍体基础上，染色体数目增加或减少一条甚至多条；重复是指染色体上增加了相同的某个区段因而引起变异的现象；缺失是指染色体某一区段丢失的现象；嵌合体在遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体；杂合性丢失(LOH)是指一对同源染色体上特定位点的等位基因，一侧带有突变(有害)，一侧正常，由于某种原因，正常的一侧对应序列发生缺失或突变，致使该基因座位变为半合或纯合；单亲二体(UPD)指来自父母一方的染色体片段被另一方的同源部分取代，或一个个体的两条同源染色体都来自同一亲体；单倍体是指体细胞含有一套染色体组，三倍体则是指每一个细胞中具有三套完整的染色体组。基因组拷贝数变异的检测可应用到组织检测如肿瘤组织、羊水、流产物组织，液体活检如血液、尿液的细胞、游离核酸，单细胞领域如胚胎植入前遗传学诊断、胚胎植入遗传学筛查、癌症患者血液中游离的循环肿瘤细胞、孕妇外周血中游离的胎儿细胞、干细胞、单细胞或几个细胞的微生物。

目前基因组拷贝数变异检测的主要方法有：比较基因组杂交，荧光定量PCR，荧光原位杂交，多重连接探针扩增技术，高通量测序。其中，比较基因组杂交分辨率比较低，Mb级，通量低，成本高；荧光定量PCR同样通量低，成本高，一次只能测一个拷贝数变异；荧光原位杂交，只针对特定位置，分辨率低，探针杂交效率不稳定；多重连接探针扩增技术，操作复杂，通量低，成本高，覆盖度小，易造成PCR污染；鉴于此，我们提出了一种基于高通量测序技术检测拷贝数变异的文库构建方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于高通量测序技术检测拷贝数变异的文库构建方法，解决了上述背景技术提到的问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种基于高通量测序技术检测拷贝数变异的文库构建方法，所述构建方法包括以下步骤：

S1、待测样本的处理和模板的提取；

S2、使用内切酶对模板进行酶切；

S3、酶切完成后按接头Mix配制数据配制接头Mix；

S4、片段双选；

S5、文库扩增；

S6、PCR产物纯化；

S7、DNA文库质检；

S8、文库测序。

可选的，所述S1进一步的包括以下步骤：

样品适用范围包括手术切除的新鲜病理组织，甲醛固定石蜡包埋病理组织，石蜡切片及血液等标本；

蜡块样品切成5～8μM切片，取5片，或已经制成的5～8μM切片取5片，经过脱蜡剂脱蜡后，使用石蜡包埋DNA提取试剂盒提取基因组DNA；