[发明专利]Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD脑类器官病理模型方法

说明书

本发明涉及诱导AD脑类器官病理模型技术领域，具体公开了Aβ42‑hIAPP共寡聚化物诱导的AD脑类器官病理模型方法，将Aβ42‑hIAPP共寡聚化物注射到脑类器官实质内，并在体外继续培养至获得AD脑类器官病理模型。所述脑类器官实质为由人源诱导性多能干细胞诱导的全脑类器官。采用本发明能够处理的脑类器官能够诱导出与人类AD基本一致的病理改变。

技术领域

本发明涉及涉及诱导AD脑类器官病理模型技术领域，具体涉及Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD脑类器官病理模型方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)，又称老年痴呆症，是一种渐进性发展、与衰老相关的神经退行性疾病。由于年龄、遗传和代谢等各种生物变化及环境的影响，人类极易罹患AD，且很难在其他物种中复制。由于目前AD病因不明且发病机制复杂，导致缺乏早期诊断方法和有效治疗手段，并且长期照顾AD患者需消耗大量人力、财力和专业设施，也给患者、家庭和社会带来了极大的精神和经济负担。自2003年以来，除2021年6月FDA加速审批了一个颇具争议又缺乏有效性证据的单抗药物Aducanumab外，基本没有用于治疗AD的新药获批，亦没有缓解AD疾病疗法的获批。这一方面是因为AD发病机制、新药研发和早期诊断等研究缺少可靠的“拟临床”动物模型，另一方面是缺少可靠的能用于筛选AD相关治疗药物的脑类器官病理模型。

发明内容

本发明针对上述技术问题提供一种能够可诱导出与人类AD基本一致的病理的Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD脑类器官病理模型方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD脑类器官病理模型方法，将Aβ42-hIAPP共寡聚化物注射到脑类器官实质内，并在体外继续培养至获得AD脑类器官病理模型。

优选的，所述脑类器官实质为由人源诱导性多能干细胞诱导的全脑类器官。

优选的，所述脑类器官实质先在体外培养90天以上，然后通过微泵注射所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物；注射速度为10nL/s以下，每次注射量为3μg以下，在3-4个月内共注射12μg以下。

优选的，所述脑类器官实质先在体外培养100天以上，然后通过微泵注射所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物；注射速度为4～6nL/s，每次注射量为1～2μg，在3-4个月内共注射4～6μg。

优选的，所述注射速度为5nL/s，每次注射量为1μg，在3-4个月内共注射4μg。

优选的，所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物由可溶性β-淀粉样蛋白42寡聚体与人胰岛淀粉样蛋白多肽合成。

优选的，所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物的合成方法如下：

(1)Aβ42以及hIAPP冻干肽分别溶于100％1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇中，浓度1mM，室温孵育1h后，将含hIAPP肽溶液于温和的氮气流下蒸发1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇得到干燥hIAPP肽膜；

(2)Aβ42与hIAPP肽膜分别在二甲亚砜中重悬，然后在浓度10mMHEPES缓冲液中进一步稀释，最终浓度为皆为110μM；

(3)快速取两体系1：1混匀，4℃共同孵育24h即得Aβ42-hIAPP共寡聚化物。

本发明与现有技术相比的有益效果：

使用本发明的技术方案处理的脑类器官能够诱导出与人类AD基本一致的病理改变。

附图说明

图1是透射电镜观察下AβO的形态图；

图2是透射电镜观察下hIAPP的形态图；