[发明专利]一种新型冠状病毒特异性T细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种新型冠状病毒特异性T细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)从淋巴细胞中富集新型冠状病毒特异性T细胞；

2)将所述新型冠状病毒特异性T细胞在含滋养细胞、IL-2和自体血浆的T细胞完全培养基中进行第一培养；

3)将步骤2)中培养获得新型冠状病毒特异性T细胞在含滋养细胞、IL-2、自体血浆和新型冠状病毒抗原肽的T细胞完全培养基中进行第二培养，得到新型冠状病毒特异性T细胞。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2)中所述滋养细胞与所述新型冠状病毒特异性T细胞的数量比为95～105:1；

所述滋养细胞的终密度为(1～5)×10⁶细胞/ml；

所述自体血浆的体积百分含量为4％～6％；

所述IL-2的终浓度为90～110IU/ml。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2)中T细胞扩增培养基的基础培养基为Stemcell Im munoCult^TM-XF T细胞完全培养基。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2)中在所述第一培养时，每隔2～3天补加一次新鲜的T细胞完全培养基，使活细胞的密度控制为1.0～3.0×10⁵个细胞/mL。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2)中所述第一培养的温度为36～38℃；

所述第一培养的CO₂浓度为5％；

所述第一培养的时间为10～12d。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3)中所述新型冠状病毒抗原肽的终浓度为1.8～2.2μg/ml；

所述滋养细胞的密度为(1～4)×10⁶细胞/ml；

所述滋养细胞与所述新型冠状病毒特异性T细胞的数量比为95～105:1；

所述自体血浆的体积百分含量为4％～6％；

所述IL-2的终浓度为90～110IU/ml。

7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3)中在所述第二培养时，每隔2～3天补加一次新鲜的T细胞完全培养基，使活细胞的密度控制为(0.5～1.0)×10⁶个细胞/mL。

8.根据权利要求1～7任意一项所述制备方法，其特征在于，步骤1)中所述富集新型冠状病毒特异性T细胞的方法，将所述淋巴细胞依次经过新型冠状病毒抗原肽、IFN-gamma捕获试剂和IFN-γ富集试剂刺激培养，分离，富集得到新型冠状病毒特异性T细胞。

9.权利要求1～8任意一项所述制备方法制备得到的新型冠状病毒特异性T细胞，其特征在于，所述新型冠状病毒特异性T细胞针对新型冠状病毒发生特异性免疫反应。

10.权利要求1～8任意一项所述制备方法制备得到的新型冠状病毒特异性T细胞或权利要求9所述新型冠状病毒特异性T细胞在制备防治新型冠状病毒感染的药物中的应用。