[发明专利]一种新型冠状病毒特异性T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种新型冠状病毒特异性T细胞及其制备方法和应用，属于功能细胞技术领域。本发明从外周血PBMC细胞中富集的新型冠状病毒特异性T细胞，经过两轮体外扩增，获得10亿数量级、扩增倍数高于10000倍、纯度90％以上的新型冠状病毒特异性T细胞，且表现出对新型冠状病毒具有特异性免疫反应的特点，为临床上防治新型冠状肺炎提供了新思路。

技术领域

本发明属于功能细胞技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒特异性T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

通过接种新型冠状疫苗产生中和抗体是抵抗新型冠状感染以及降低重症率和死亡率的有力保障。然而接种疫苗产生的中和抗体量随着时间而衰变，只能提供大致半年的保护期。并且部分患有基础疾病的免疫力低下群体(包括肿瘤患者和老年人等)从疫苗接种中获得的保护力有限。此外，新型冠状病毒一直处在变异之中，尤其是新型冠状病毒感染免疫力低下人群后会加速变异，他们失衡的免疫反应为新型冠状病毒进化以及超级毒株创造了机会，因此需要额外手段帮助他们抵抗新型冠状感染。

接种疫苗除了激发体液免疫反应产生中和抗体外，也能在部分接种者中激发细胞免疫反应，包括在刺激B细胞和其他免疫细胞中发挥作用的CD4⁺辅助性T细胞以及靶向并摧毁受感染细胞的CD8⁺杀伤性T细胞。相较于新型冠状病毒中和抗体更容易受到病毒变异的影响，新型冠状特异性T细胞能识别多种新型冠状病毒变种。研究表明，新型冠状康复患者和疫苗接种者体内的新型冠状病毒特异性T细胞反应，在很大程度上不受变异毒株中突变的影响，并且对新出现的变异提供保护。

有研究显示T淋巴细胞反应强劲的新型冠状患者在新型冠状病毒感染中的存活率更高，揭示T细胞免疫应答在新型冠状患者康复中的重要作用。因此，开发新型冠状病毒特异性T细胞的体外扩增技术，将外周血中稀缺的新型冠状病毒特异性T细胞在GMP环境细胞制备车间中进行培养扩增，对感染新型冠状病毒的免疫力低下群体进行病毒特异性T细治疗，帮助患者尽快康复，避免他们成为超级变异毒株培养箱，造成院内感染和疫情流行，具有重大的医学价值以及社会和经济价值。然而，目前新型冠状病毒特异性T细胞仅仅是经过体内免疫产生，这大大阻碍了通过T淋巴细胞防治新型冠状肺炎的进程。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种新型冠状病毒特异性T细胞及其制备方法，通过体外富集和两轮扩增，能够得到数量大、纯度高的新型冠状病毒特异性T细胞，为临床防治新型冠状病毒感染提供了基础。

本发明提供了一种新型冠状病毒特异性T细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)从淋巴细胞中富集新型冠状病毒特异性T细胞；

2)将所述新型冠状病毒特异性T细胞在含滋养细胞、IL-2和自体血浆的T细胞完全培养基中进行第一培养，

3)将步骤2)中培养获得新型冠状病毒特异性T细胞在含滋养细胞、IL-2、自体血浆和新型冠状病毒抗原肽的T细胞完全培养基中进行第二培养，得到新型冠状病毒特异性T细胞。

优选的，步骤2)中所述滋养细胞与所述新型冠状病毒特异性T细胞的数量比为95～105:1；

所述滋养细胞的终密度为(1～5)×10⁶细胞/ml；

所述自体血浆的体积百分含量为4％～6％；

所述IL-2的终浓度为90～110IU/ml。

优选的，步骤2)中T细胞扩增培养基的基础培养基为StemcellImmunoCult^TM-XFT细胞完全培养基。

优选的，步骤2)中在所述第一培养时，每隔2～3天补加一次新鲜的T细胞完全培养基，使活细胞的密度控制为1.0～3.0×10⁵个细胞/mL。

优选的，步骤2)中所述第一培养的温度为36～38℃；