[发明专利]一种静注COVID-19人免疫球蛋白的生产方法

说明书

本发明提供了一种静注COVID‑19人免疫球蛋白的生产方法，属于血液制品生产技术分离领域。本发明将含有2019‑nCoV抗体的血浆通过低温乙醇蛋白分离法进行分离，然后依次进行纯化过滤、超滤、除菌、低pH病毒灭活和二次超滤，稀释配制得到静注COVID‑19人免疫球蛋白。本发明所得静注COVID‑19人免疫球蛋白产品中SARS‑Cov‑2中和抗体效价高，能达到6875U(1.25g，25ml)/瓶，产品质量稳定、收率高，可用于2019‑nCoV患者的治疗。

技术领域

本发明属于血液制品生产技术分离领域，尤其涉及一种静注COVID-19人免疫球蛋白的生产方法。

背景技术

冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。新型冠状病毒主要的传播途径还是呼吸道飞沫传播和接触传播，导致人民健康受到严重威胁。大部分人群经过接种新冠疫苗，身体内会产生针对新冠病毒的特异性抗体，可杀灭和清除病毒。静注COVID-19人免疫球蛋白，可在病程早期用于有高危因素、病毒载量较高、病情进展较快的患者。因此，如何制备得到抗体效价高、产品质量稳定、收率高的静注COVID-19人免疫球蛋白是本领域研究的重点之一。

低温乙醇法是人血浆白蛋白的制备方法之一，该方法是1940年由美国哈佛大学医学院的EdwinJ.Cohn教授发明的，因此又称为“孔氏法”。孔氏法最初用来分离牛血清白蛋白，随后应用于人血浆分离。低温乙醇法是以混合血浆为原料，逐级降低酸度，提高乙醇浓度，同时降低温度，各种蛋白在不同的条件下以组分的形式分步从溶液中析出，并通过离心或者过滤分离出来。但低温乙醇法存在蛋白收率低、稳定性差等问题，故该方法需要改良以提高白蛋白的收率和产品稳定性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种静注COVID-19人免疫球蛋白的生产方法，制备得到的静注COVID-19人免疫球蛋白中SARS-Cov-2中和抗体效价高，产品质量稳定、收率高。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种静注COVID-19人免疫球蛋白的生产方法，包括以下步骤：

(1)收集含有2019-nCoV抗体的血浆；

(2)血浆中加入醋酸-醋酸钠缓冲液，调节血浆pH为6.8～7.1，加入低温乙醇至乙醇浓度为20％，血浆温度降低至-5.5～-4.5℃后搅拌、静置，压滤得到沉淀；

(3)步骤(2)所得沉淀溶解于注射用水中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液，调节pH为5.1～5.4，加入低温乙醇至乙醇浓度为17％，血浆温度降低至-3.5～-2.5℃后搅拌、静置，压滤得到压滤液；

(4)步骤(3)所得压滤液中加入2～3wt％NaCl溶液，再加入NaHCO₃溶液调节pH为7.1～7.3，加入低温乙醇至乙醇浓度为25％，血浆温度降低至-9～-8℃后搅拌、静置，压滤得到沉淀；

(5)步骤(4)所得沉淀依次进行纯化过滤、超滤、除菌、低pH病毒灭活和二次超滤，稀释配制得到静注COVID-19人免疫球蛋白。

优选的，所述醋酸-醋酸钠缓冲液pH值为3.8～4.2，所述低温乙醇为-15℃以下的95％乙醇。

优选的，所述搅拌时间为1.5～2.5h，静置时间为1.5～2.5h。

优选的，压滤前加入处理液重量1～1.5％的硅藻土，搅拌25～35min。

优选的，所述NaCl溶液浓度为1mol/L，所述NaHCO₃溶液浓度为1mol/L。

优选的，压滤后采用与处理液等浓度、等温度的乙醇冲洗沉淀和滤板。