[发明专利]检测海豚链球菌的实时荧光MIRA和MIRA-LFD引物组及检测方法

权利要求书

1.引物探针组在制备基于实时荧光MIRA法检测海豚链球菌的试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物探针组由引物1、引物2和探针1组成；

所述引物1为：5’-TAAAGCATTAGAAGCGGCTAAGAAAGAAG-3’；

所述引物2为：5’-CAATAGTTGCTTCAAGTTCTGCTTTTTCA-3’；

所述探针1为：5’-TTTCCAATTCAGCTTTTGTTTCTGCTAGT/i6F

AMdT/idSp/iBHQ1dT/AGTTTCAAGGTCTTTAG-3’。

2.引物探针组在制备基于MIRA-LFD法检测海豚链球菌的试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物探针组由引物1、引物2和探针2组成；

所述的引物为1：5’-TAAAGCATTAGAAGCGGCTAAGAAAGAAG-3’；

所述引物为2：5’-CAATAGTTGCTTCAAGTTCTGCTTTTTCA-3’，所述引物2的5’末端标记有Biotin；

所述探针2为5’-6-FAM- TTTCCAATTCAGCTTTTGTTTCTGCTAGTT/idSp/TAGTTTC

AAGGTCTTTAG- C3 Spacer -3’。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，实时荧光MIRA的扩增反应体系如下：14.7μL的A buffer，1μL的10μM引物1，1μL的10μM引物2，0.5μL的10μM探针1，2μL的海豚链球菌DNA模板，4.55μL的ddH₂O以及1.25μL的B buffer。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，MIRA-LFD的扩增反应体系如下：14.7μL的Abuffer，1μL的10μM引物，1μL的10μM引物2，0.5μL的10μM探针2，2μL的海豚链球菌DNA模板，4.55μL的ddH₂O以及1.25μL的B buffer。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，MIRA的扩增反应温度为42℃，反应时间为20min。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，MIRA-LFD的扩增反应温度为42℃，反应时间为20min。

7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括配套检测MIRA扩增产物的核酸检测试纸条；

所述试纸条包括与所述探针标记基团结合的抗体和与所述引物2标记基团结合的抗体。

8.一种鉴定或辅助鉴定待测菌是否为海豚链球菌的方法，包括如下步骤：用权利要求2所述的引物探针组对待测菌进行MIRA扩增，检测MIRA扩增产物；再用侧流层析试纸条检测扩增产物，所述方法为非诊断目的。

9.一种鉴定或辅助鉴定待测样本是否感染海豚链球菌或含有海豚链球菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：用权利要求2所述的引物探针组对待测样本进行MIRA扩增，检测MIRA扩增产物；再用侧流层析试纸条检测扩增产物；所述方法为非诊断目的，所述MIRA扩增的模板为待测样本的核酸。