[发明专利]一种IKBKG基因第4-10外显子缺失的引物探针组对及其制备的试剂盒

说明书

本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了一种IKBKG基因第4‑10外显子缺失的引物探针组及其制备的试剂盒，所述引物探针组包括IKBKG上游扩增引物、IKBKG下游扩增引物和IKBKG荧光探针；所述IKBKG上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述IKBKG下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述IKBKG荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明的引物探针组灵敏度高、特异性好。采用本发明的引物探针组制备的试剂盒进行检测，检测方法简便快捷，重复性好，特别是由于减少了开盖进行后续电泳过程，防止了污染，同时适用于大样本筛查的需求。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种IKBKG基因第4-10外显子缺失的引物探针组及其制备的试剂盒。

背景技术

色素失禁症(incontinentia pigmenti，IP)也称Bloch-Sulzberger综合征，是一种罕见的X染色体连锁显性遗传病，多在婴儿期甚至新生儿期发病，在新生儿中的发病率0.007‰。色素失禁症患者中，约75％是由IKBKG基因(也叫做NEMO基因)的新发突变引起，10-25％的患者是由母亲遗传所引起。色素失禁症的男性胎儿多死亡，女性新生儿主要表现为肢端的水疱性皮疹，沿着Blaschko线迅速呈线状生长。视网膜和中央神经系统损伤比皮肤损伤少见，但可能更严重，且可遗留终生后遗症。

IKBKG基因位于Xq28，包含10个外显子，编码415个氨基酸。IKBKG基因基因下游35.5kb的重复区域中存在一个高度同源的假基因IKBKGP1(也叫做ΔNEOM基因)，序列排列方向与IKBKG基因相反。在已发现的导致色素失禁症的基因突变中，90％是由于IKBKG基因内4-10外显子缺失突变引起的，而序列在IKBKGP1基因中同时存在，检测IKBKG突变必须排除IKBKGP1基因的影响。

目前较为常见进行IKBKG基因检测4-10外显子缺失的方法是：使用LongPCR扩增方法鉴别缺失，使用In2(5’-GAGGACCAATACCGAGCATC-3’)和JF3R(5’-CTCGGAGACACAGGAACCAGCA-3’)扩增。而后使用琼脂糖凝胶电泳的方法进行检测，当在2.6K区域出现电泳条带的时候表明IKBKG基因存在4-10外显子缺失。longPCR法由于在PCR扩增结束后需开盖进行后续电泳，同样存在操作繁琐、容易污染等问题，且使用该流程耗费时间较长，每次需要约4-5小时。因此使用longPCR法不适用于大样本筛查的需求。

荧光定量PCR技术近年来在分子生物学领域的应用越来越广泛，其基本原理是利用Taq酶的5’-3’外切酶核酸活性，在普通PCR基础上设计荧光双标记探针，两端分别标记荧光报告基团(R)和淬灭基团(Q)；探针保持完整时R基团的荧光信号被Q基团抑制，一旦探针被切断，Q基团的抑制作用消失，R基团的荧光信号就可被检测到。该技术通过对荧光信号的检测实现对PCR过程中产物量的实时监测，除具有定量准确、检测快速等优点外，最大的优势是采用完全闭管检测，省去了对PCR产物的后处理，避免了交叉污染。而且，随着材料和仪器的进一步发展，通过在荧光探针的5’端标记不同的荧光染料(FAM、HEX、ROX等)及多通道荧光定量PCR仪，可以实现基因分型、基因突变检测、SNP分析等研究。

发明内容

本发明的目的在于提供种IKBKG基因第4-10外显子缺失的引物探针组及其制备的试剂盒，提高检测效率和准确性，适应大样本筛查的需求。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种IKBKG基因第4-10外显子缺失的引物探针组，包括IKBKG上游扩增引物、IKBKG下游扩增引物和IKBKG荧光探针；

所述IKBKG上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述IKBKG下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；