[发明专利]一种鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测用引物对组合及检测方法

权利要求书

1.一种鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测用引物对组合，其特征在于，该引物对组合为Chen-F/R、Miyoshi-F/R、Jiang-F/R，Chen-F/R、4296-F/R、Jiang-F/R，Labrie-F/R、Chen-F/R、Jiang-F/R，4296-F/R、4001-F/R、4299-F/R，Labrie-F/R、Chen-F/R、4298-F/R五种组合中的一种，各引物的序列如下表：

2.根据权利要求1所述的鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测用引物对组合，其特征在于：所述引物对组合中各引物对的浓度比例Chen-F/R：Miyoshi-F/R：Jiang-F/R＝1：2：1，Chen-F/R：4296-F/R：Jiang-F/R＝1：2：1，Labrie-F/R：Chen-F/R：Jiang-F/R＝1：1：1，4296-F/R：4001-F/R：4299-F/R＝2：1：2，Labrie-F/R：Chen-F/R：4298-F/R＝1：1：2。

3.一种鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测方法，其特征在于，利用权利要求2所述的鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测用引物对组合进行多重PCR检测，具体包括：

多重PCR反应体系为：Premix Taq^TM PCR预混液10μL、鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测用引物对组合6μL、鰤鱼诺卡氏菌DNA模板2μL、加ddH₂O补足20μL；多重PCR反应程序为95℃5min；95℃30S、48.4℃-64℃30S、72℃1min、30个循环；72℃延伸10min；PCR反应结束后进行琼脂糖凝胶电泳，根据PCR电泳图上是否出现清晰条带确定是否含有鰤鱼诺卡氏菌DNA目标片段。

4.根据权利要求3所述的鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测方法，其特征在于，对于引物对组合Chen-F/R：Miyoshi-F/R：Jiang-F/R＝1：2：1的多重PCR反应，具体包括：

多重PCR反应体系为：Premix Taq^TM PCR预混液10μL、Chen-F/R：Miyoshi-F/R：Jiang-F/R＝1：2：1的引物对组合6μL、鰤鱼诺卡氏菌DNA模板2μL、加ddH₂O补足20μL；多重PCR反应程序为95℃5min；95℃30S、57℃退火30S、72℃1min、30个循环；72℃延伸10min；PCR反应结束后进行琼脂糖凝胶电泳，根据PCR电泳图上是否出现清晰荧光条带确定是否含有鰤鱼诺卡氏菌DNA目标片段。

5.根据权利要求3所述的鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测方法，其特征在于，对于引物对组合Chen-F/R：4296-F/R：Jiang-F/R＝1：2：1的多重PCR反应，具体包括：

多重PCR反应体系为：Premix Taq^TM PCR预混液10μL、Chen-F/R：4296-F/R：Jiang-F/R＝1：2：1的引物对组合6μL、鰤鱼诺卡氏菌DNA模板2μL、加ddH₂O补足20μL；多重PCR反应程序为95℃5min；95℃30S、53℃退火30S、72℃1min、30个循环；72℃延伸10min；PCR反应结束后进行琼脂糖凝胶电泳，根据PCR电泳图上是否出现清晰荧光条带确定是否含有鰤鱼诺卡氏菌DNA目标片段。

6.根据权利要求3所述的鰤鱼诺卡氏菌多重PCR检测方法，其特征在于，对于引物对组合Labrie-F/R：Chen-F/R：Jiang-F/R＝1：1：1的多重PCR反应，具体包括：

多重PCR反应体系为：Premix Taq^TM PCR预混液10μL、Labrie-F/R：Chen-F/R：Jiang-F/R＝1：1：1的引物对组合6μL、鰤鱼诺卡氏菌DNA模板2μL、加ddH₂O补足20μL；多重PCR反应程序为95℃5min；95℃30S、48.4℃退火30S、72℃1min、30个循环；72℃延伸10min；PCR反应结束后进行琼脂糖凝胶电泳，根据PCR电泳图上是否出现清晰荧光条带确定是否含有鰤鱼诺卡氏菌DNA目标片段。