[发明专利]一种生产白喉毒素无毒突变蛋白的方法及其使用的特异DNA分子

权利要求书

1.一种多肽，包括信号肽和白喉毒素无毒突变蛋白；

所述信号肽为如下A1)-A5)中任一种：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No：4的信号肽FIGI；

A2)氨基酸序列是SEQ ID No：6的信号肽SipA；

A3)氨基酸序列是SEQ ID No：8的信号肽YTFQ；

A4)氨基酸序列是SEQ ID No：10的信号肽OMPF；

A5)将A1)-A4)所述多肽经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)-A4)的多肽具有80％以上的同一性且具有相同功能的多肽；

所述白喉毒素无毒突变蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种DNA分子；所述DNA分子的核苷酸序列包括如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的DNA分子。

3.一种DNA分子，其特征在于：所述DNA分子编码权利要求1所述的多肽。

4.根据权利要求3所述DNA分子，其特征在于，所述的DNA分子由编码信号肽的核苷酸序列和编码白喉毒素无毒突变蛋白的核苷酸序列组成；

优选的，所述编码白喉毒素无毒突变蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或3所示；

优选的，所述编码信号肽的核苷酸序列可为C1)、C2)、C3)、C4)或C5)：

C1)核苷酸序列如SEQ ID No：5所示的DNA分子；

C2)核苷酸序列如SEQ ID No：7所示的DNA分子；

C3)核苷酸序列如SEQ ID No：9所示的DNA分子；

C4)核苷酸序列如SEQ ID No：11所示的DNA分子；

C5)与C1)-C4)所述信号肽的核苷酸序列具有90％或90％以上同一性的DNA分子。

5.含有权利要求2至4任一所述DNA分子的重组质粒、重组菌或载体。

6.权利要求2至4任一所述DNA分子或含有权利要求2至4任一所述DNA分子的重组质粒、重组菌或载体在表达或生产白喉毒素无毒突变蛋白中的应用；

所述白喉毒素无毒突变蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

7.一种表达或生产CRM197蛋白的方法，包括如下步骤(1)：发酵培养宿主细胞；所述宿主细胞包含编码信号肽的核苷酸序列和编码权利要求1所述白喉毒素无毒突变蛋白的核苷酸序列；

所述信号肽为如下A1)-A5)中任一种：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No：4的信号肽FIGI；

A2)氨基酸序列是SEQ ID No：6的信号肽SipA；

A3)氨基酸序列是SEQ ID No：8的信号肽YTFQ；

A4)氨基酸序列是SEQ ID No：10的信号肽OMPF；

A5)将A1)-A4)所述信号肽经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)-A4)的多肽具有80％以上的同一性且具有相同功能的信号肽；

优选的，所述方法还包括步骤(2)：培养所述宿主细胞，使得宿主菌的周质空间表达CRM197蛋白；

优选的，所述宿主为细菌、酵母、昆虫细胞或哺乳细胞。