[发明专利]一种咔喏霉素中有关物质的检测方法

说明书

本发明涉及咔喏霉素中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱对咔喏霉素有关物质进行定性定量检测。本发明为咔喏霉素中有关物质的检测提供了一种准确有效的检测方法，保证咔喏霉素相关产品质量。

技术领域

本发明属于药物杂质的药物分析检测领域，具体涉及咔喏霉素中有关物质的分析检测方法。

背景技术

咔喏霉素(kanamycin)，其分子式为C₇₃H₁₀₃N₁₇O₂₆，[M-1]的分子式为C₇₃H₁₀₂N₁₇O₂₆，其精确分子质量为1632.7182。质荷比m/z＝1632.7182(实际值1632.7202)[M-2]的分子式为C₇₃H₁₀₁N₁₇O₂₆，其精确分子质量为1631.7104，质荷比m/z＝815.8552(实际值815.8565)。咔喏霉素是首次通过全化学合成方式获得的类似于达托霉素的环脂肽类化合物。由于环脂肽类化合物空间构象复杂，存在多个手性中心，无论是手性全合成还是手性拆分，都具有极大的合成难度，由于合成步骤长，合成过程中副产物较多，如何实现主药和杂质的结构全解析，并进行有效的质量控制，都将面临巨大挑战。目前现有技术中未见关于咔喏霉素有关杂质的研究和报道，急需开发一种有效分离各杂质的检测方法，以实现对其进行有效的质量控制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种咔喏霉素原料药及其制剂中有关物质的检测方法，采用的技术方案如下：

一种使用高效液相色谱法对咔喏霉素中有关物质进行检测，其色谱条件为：

采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂5μm*4.6*250mm的色谱柱；以pH 4.5-4.7的磷酸二氢铵溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱；所述咔喏霉素主峰的保留时间在38～41分钟之间。

所述检测方法，按下表1进行梯度洗脱：

表1：

所述梯度洗脱顺序优选为：

表2：

本发明所述一种咔喏霉素中有关物质的检测方法，所述色谱条件还包括：进样量为15-25μl；流速为0.8-1.2ml/min，优选为0.9-1.1ml/min；检测时间为95min；柱温为25-30℃；检测波长为220-225nm。

本发明所述一种咔喏霉素中有关物质的检测方法，步骤如下：

(1)色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂5μm*4.6*250mm的色谱柱；以pH 4.5-4.7的磷酸二氢铵溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱；进样量为15-25μl；流速为0.8-1.2ml/min，优选为0.9-1.1ml/min；检测时间为95min，后运行15min；柱温为25-30℃；检测波长为220-225nm；所述咔喏霉素主峰的保留时间在38～41分钟之间，按下表3进行梯度洗脱：

表3：

(2)流动相溶液制备：以pH 4.5-4.7的磷酸二氢铵溶液为流动相A，以乙腈为流动相B；

(3)空白溶液制备：以步骤(1)中初始流动相溶液为空白溶液，即流动相A和流动相B以体积比为64-66:34-36的混合溶液；