[发明专利]一种测定猴血清中贝伐珠单抗的浓度的质谱检测方法

权利要求书

1.一种测定猴血清中贝伐珠单抗的浓度的质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

加样，取猴血清样品20.0μL，置于2.0mL离心管中，加60.0μL 0.1mg/mL十二烷基磺酸钠溶液，涡流2min，加入20.0μL 50.0mM二硫苏糖醇溶液，涡流2min；

还原变构，60℃超声30min；

衍生化，冷却后加入10.0mL 250mM碘乙酰胺溶液，避光条件下低速涡流30min；

蛋白沉淀，加入冷藏后的甲醇200μL，涡流10min，14000rpm，4℃，离心10min；

酶解，取上清后丢弃，加入100μL 100mM碳酸氢铵溶液，涡流2min，加入100mL 0.500mg/mL胰蛋白酶溶液，60℃超声60min；

富集浓缩，加入50.0μL含1％甲酸的乙腈溶液，涡流2min，加入200μL乙腈，涡流5min，14000rpm，4℃，离心10min，取200μL上清液到96孔板中，氮气吹干，加入100μL初始流动相复溶，涡旋混匀；

仪器检测，取5μL进行LC-MS/MS分析，其中，

仪器检测中的色谱条件，采用Eclipse Plus C18色谱柱，梯度洗脱，流速200μL/min，柱温50℃，进样量5μL，流动相A为0.5mM醋酸铵水溶液，流动相B为乙腈，流动B中含有0.1％甲酸；

仪器检测中的质谱条件，电喷雾电离源，电压为5500V；离子源温度为550℃；Gas 1、Gas2、Curtain Gas压力分别为60、80和25psi，扫描模式为+MRM，监测离子反应分别为：贝伐珠单抗特征肽段FTFSLDTSK m/z 523.2→m/z 797.4，CE为23eV；DP为100V，扫描时间为300ms。